चबाने वाली कीड़े ए thaliana के प्रतिरोध परीक्षण के लिए च्वाइस और नहीं, च्वाइस Assays

Summary

संयंत्र चबाने कीट शाकाहारी करने के लिए प्रतिरोध कई मायनों में परीक्षण किया जा सकता है. यहाँ, हम प्रदर्शन कैसे एक विकल्प और कोई विकल्प मॉडल संयंत्र Arabidopsis thaliana कीट प्रजातियों pieris rapae के खिलाफ प्रतिरोध की पहचान के साथ एक प्रयोग स्थापित करने के लिए.

Abstract

छोटे सफेद गोभी की तितली का लार्वा कृषि सेटिंग में एक कीट हैं. यह कमला प्रजातियों गोभी परिवार में पौधों, जो गोभी जैसे कई फसलों में शामिल से खिलाती है, ब्रोकोली, ब्रसेल्स स्प्राउट्स आदि कीड़े के पालन गोभी के पौधों पर ग्रीनहाउस में जगह लेता है. कम से कम दो पिंजरों pieris rapae के पालन के लिए आवश्यक हैं. लार्वा और वयस्कों, तितलियों होते अन्य के लिए. आदेश में संयंत्र हार्मोन और इस कीट प्रतिरोध में विषाक्त रसायन संयंत्र की भूमिका की जांच करने के लिए, हम दो प्रयोगों का प्रदर्शन. सबसे पहले, चबाने कीट pieris rapae प्रतिरोध में jasmonic एसिड (जावेद – एक संयंत्र हार्मोन कीड़ों के लिए प्रतिरोध में अक्सर संकेत) की भूमिका का निर्धारण. कमला विकास जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती जावेद के उत्पादन में बिगड़ा पौधों पर तुलना की जा सकती है. यह प्रयोग "कोई विकल्प" माना जाता है, क्योंकि लार्वा के लिए एक एकल संयंत्र जो synthesizes या जावेद की कमी है पर निर्वाह करने के लिए मजबूर कर रहे हैं. दूसरा, हम एक प्रयोग है कि glucosinolates, जो oviposition (अंडे बिछाने) संकेतों के रूप में उपयोग किया जाता है की भूमिका की जांच प्रदर्शित करता है. यहाँ, हम एक "विकल्प" है जो प्रयोग में महिला तितलियों के करने के लिए या तो जीनोटाइप के पौधों पर अपने अंडे देना चुन अनुमति दी जाती है में glucosinolate उत्पादन में WT और उत्परिवर्ती बिगड़ा Arabidopsis का उपयोग करें. इस वीडियो दोनों के रूप में के रूप में अच्छी तरह assays प्रतिनिधि परिणाम के लिए प्रयोगात्मक स्थापना को दर्शाता है.

Protocol

नहीं च्वाइस का प्रयोग करें: ध्यान से एक प्लास्टिक के कप में ब्याज की Arabidopsis संयंत्र रखें. इस मामले में: कर्नल (WT) शून्य और एक उत्परिवर्ती जावेद के उत्पादन में बिगड़ा. यकीन है कि तुम पत्तियों को नुकसान की सीमा. के लिए कि मैं इस तूलिका के पीछे का उपयोग करें. गोभी पर कॉलोनी से एक हौसले से रची लार्वा रखना ठीक तूलिका का प्रयोग करें. Arabidopsis पौधों पर ध्यान लार्वा जगह. दिन 4, 7, 10 में वजन लार्वा. सुझाव: कम दिन (8 घंटा प्रकाश) शर्तों के वनस्पति वृद्धि (1 लार्वा एक संयंत्र पर अपनी पूरी जीवन चक्र को पूरा कर सकते हैं) को बढ़ाने के तहत अपने संयंत्रों आगे बढ़ें. च्वाइस प्रयोग: दो पौधों चयनित प्रत्येक जीनोटाइप. एक ही बर्तन में पौधों बढ़ने, ट्रे प्रभाव के रूप में अन्य कारकों, आदि की सीमा एक तितली के पिंजरे में पौधों रखें. एक उपजाऊ महिला का चयन करें. मैं आमतौर पर एक महिला है कि सक्रिय रूप से पालन कॉलोनी में अंडे बिछाने को पकड़ने. 24 घंटे के लिए दो संयंत्रों की पसंद के साथ पिंजरे में महिला रिलीज. टिप 1: करने के लिए सीखने का एक असर को खत्म करने, महिलाओं में बाद में पसंद परीक्षण के लिए पुनः प्रयोग नहीं करते. टिप 2: एक ही पौधों है कि एक समान विकास phenotype है की तुलना कर सकते हैं. वैकल्पिक रूप से, आप प्रत्येक जीनोटाइप से एक Erlenmeyer फ्लास्क के शीर्ष पर एक पत्ती और माउंट सकता है एक महिला अपने आकर्षण की तुलना. कृपया यात्रा संयंत्र जीवविज्ञान की वार्षिक समीक्षा के बारे में अधिक जानकारी के लिए इस प्रोटोकॉल और संयंत्र कीट herbivory के लिए प्रतिरक्षा.