Маркировка стволовых клеток с флуоресцентными красителями для неинвазивного обнаружения оптических изображений с
Summary
Это видео показывает методы маркировки человеческих эмбриональных стволовых клеток и мезенхимальных стволовых клеток с флуоресцентными красителями. Эта техника может быть использована для отслеживания в естественных условиях трансплантированных стволовых клеток с оптических изображений и гистопатологические корреляции с флуоресцентной микроскопии.
Abstract
Оптическая томография (OI) это простой, быстрый и недорогой инструмент для прижизненного мониторинга новых стволовых клеток терапий. Методика основана на бывших маркировки естественных условиях из стволовых клеток с флуоресцентным красителем, последующее внутривенное введение меченых клеток и визуализации их накопление в определенных органах-мишенях или патологий. Представлена методика демонстрирует, как мы называем мезенхимальных стволовых клеток человека (hMSC) простым инкубации с липофильных флуоресцентного красителя DID (C67H103CIN2O3S) и как мы называем человека стволовых эмбриональных клеток (чЭСК) с FDA утвержденных флуоресцентного красителя индоцианина зеленого (МКГ). Поглощение через механизм соблюдения и распространение lypophilic красителя на мембране ячейки бислоя фосфолипидов. Маркировки эффективности, как правило, лучше, если клетки инкубировали с красителем в бессывороточной СМИ, в отличие от инкубации в сыворотке средах. Кроме того, добавление протамина сульфат агентом трансфекции значительно улучшает поглощение контрастного вещества.
Protocol
Discussion
О. И. представляет собой относительно новую технику обработки изображений, основанный на обнаружении флуоресценции. О. И. столь же чувствительны, как радиоактивный индикатор основе методов визуализации, но не связан ни с облучением экспозиции. О. И. предоставляет эффективные средства отслеживани?…
Acknowledgements
Этот проект был поддержан Леон Дж. Тал грант SEED Калифорнийского института регенеративной медицины. Тобиас Хеннинг было профинансировано исследований стипендию от немецкого исследовательская ассоциация (DFG, Его 4578/1-2). Мы хотим выразить искреннюю признательность Хуанито Менесес за его советы по культуре эмбриональных стволовых клеток человека.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
Riferimenti
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 — a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe. Eur J Nucl Med & Mol Imaging. 33, 998-1006 (2006).
- Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. Cell Tracking with Optical imaging. Eur Radiol. 2, 350-357 (2003).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
