أكتين المشارك الترسيب الفحص ، وبالنسبة للتحليل البروتين ملزمة لF - أكتين
Summary
البروتينات ربط أكتين الخيطية (F – أكتين) من خلال وحدات أكتين متميزة ملزمة. في هذا الفيديو نبدي الداخلي أكتين شارك في الترسيب ، وهو المختبر في فحص روتيني لتحليل البروتينات أو المجالات المحددة التي تربط F – أكتين.
Abstract
الهيكل الخلوي أكتين داخل الخلية هو عبارة عن شبكة من خيوط الأكتين الذي يسمح للحركة الخلايا والعمليات الخلوية ، والتي تولد التوتر ويساعد في شكل يحافظ الخلوية. على الرغم من أن الهيكل الخلوي أكتين هو بنية جامدة ، بل هو بنية ديناميكية التي يتم إعادة عرض باستمرار. ويمكن لعدد من البروتينات ربط الهيكل الخلوي أكتين. هو المطلوب في كثير من الأحيان ملزمة من بروتين خاص لأكتين – F لدعم الملاحظات الخلية أو البيولوجية لتعزيز فهم العمليات الحيوية نتيجة لإعادة تشكيل الهيكل الخلوي أكتين. شارك في فحص الترسيب أكتين هو المختبر في فحص روتيني لتحليل الملزمة للبروتينات معينة أو المجالات البروتين مع أكتين – F. المبادئ الأساسية للمقايسة تنطوي على حضانة للبروتين من الفائدة (الطول الكامل أو مجال) مع F – أكتين ، خطوة تنبيذ فائق لتكوير F – أكتين وتحليل البروتين المترسبة التعاون مع أكتين – F. ويمكن تصميم أكتين المشترك الترسيب المقايسات وفقا لقياس أكتين الانتماءات الملزمة والمقايسات في المنافسة.
Protocol
Discussion
أكتين المشترك الترسيب هو بسيط في فحص المختبر لتحليل البروتينات specfic ملزمة لأكتين – F. في هذا الفيديو ، ونظهر مثال واحد بسيط كيف أكتين المشترك الترسيب يمكن الاضطلاع بها. نعرض كيفية تحضير F – أكتين ، وإعداد هذا البروتين لفحصها وإجراء أكتين المشترك الترسيب. وينبغي النظر في عدد من النق…
Acknowledgements
أشكر لك الدكتور برافين كومار في المختبر ويتمان في سان فرانسيسكو للفيلم من الأكتين في الخلايا HaCAT.
Riferimenti
- Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin. Biochimica. 14, 15418-15428 (2004).
- Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength. Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).
- Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain. J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).
