肌动蛋白共沉淀测定; F -肌动蛋白结合蛋白分析
Summary
蛋白质结合丝状肌动蛋白通过不同的肌动蛋白结合模块（F – actin的）。在这个视频中，我们共同沉淀，这是一个经常使用的分析，结合F -肌动蛋白的蛋白质或特定域在体外实验证明肌动蛋白的过程。
Abstract
细胞内的肌动蛋白细胞骨架的微丝网络，使细胞和细胞进程的运动，而产生的紧张局势，并有助于保持细胞形态。虽然肌动蛋白细胞骨架是一个刚性的结构，它是一个动态的结构，不断重塑。一些蛋白质可以结合到肌动蛋白细胞骨架。 F – actin的一种特定的蛋白质结合通常需要支持细胞生物学的观察，或进一步了解由于肌动蛋白细胞骨架重塑的动态过程。肌动蛋白共沉淀实验是在体外实验中通常用来分析特定的蛋白质或F -肌动蛋白结构域的结合。检测的基本原则，包括与F -肌动蛋白（孵化全长或域），超速离心沉淀的F -肌动蛋白和合作与F -肌动蛋白沉积的蛋白质的分析步骤。肌动蛋白的共沉淀实验可以设计相应的措施，肌动蛋白的亲和力和竞争分析。
Protocol
1。肌动蛋白的制备在这个实验中使用的肌动蛋白的来源是从骨架公司股票在10毫克/毫升-70℃冷冻保存等分获得的非肌肉的人血小板（β-肌动蛋白）。肌动蛋白检测，稀释至0.4毫克/毫升含有5毫米的Tris pH值8， 氯化钙 0.2毫米，0.2毫米ATP和0.5毫米的DTT，4℃离心10分钟，在20000克的缓冲上清，这是单体肌动蛋白聚合。另外50 mM的氯化钾，1毫米的ATP和2毫米MgCl 2的诱导肌…
Discussion
肌动蛋白共沉淀是一个简单分析F -肌动蛋白结合specfic蛋白在体外试验。在这个视频中，我们展示了一个简单的肌动蛋白可以进行合作沉淀的一个例子。我们将展示如何准备F -肌动蛋白，准备要测试的蛋白和肌动蛋白的共同沉淀的过程。开展肌动蛋白共同沉淀分析时应该考虑的若干要点。例如，孵化缓冲组件可以进行测试，pH值，温度和盐的浓度可能会影响到F -肌动蛋白结合蛋白的不同而有所不同。我们已经证明?…
Acknowledgements
感谢您在惠特曼在加州大学旧金山分校的实验室Praveen库马尔博士在HaCaT细胞中的肌动蛋白的电影。
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Srivastava, J., Barber, D. Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin. J. Vis. Exp. (13), e690, doi:10.3791/690 (2008).