완전한 개발 두뇌 속에 생체내에서 단일 세포 Electroporation
Summary
단일 셀 electroporation (SCE)는 생체내 준비를 포함한 그대로 조직 내의 개별 세포로 DNA 또는 기타 macromolecules의 전달을 허용하는 전문 기술입니다. Xenopus laevis 올챙이의 손상 뇌 내의 뉴런에 형광 염료 또는 플라스미드 DNA의 SCE에 대해 우리가 세부 절차를.
Abstract
단일 셀 electroporation (SCE)는 생체내 준비를 포함한 그대로 조직 내의 개별 세포로 DNA 또는 기타 macromolecules의 전달을 허용하는 전문 기술입니다. 이 기법의 독특한 장점은 주변 조직이 변형 떠나는 동안 실험 조작은이를 통해 글로벌 트리 트먼트로 인한 사람의 휴대 자율 효과를 구별, 각각의 세포에서 수행할 수 있습니다됩니다. 생체내 이미징 기술의 고급과 결합하면 형광 마커 SCE는 세포 형태, 세포 성장, 그리고 초에서 일까지 timescales 이상의 세포 사건의 직접적인 시각화 수 있습니다. 이 기법은 생체내 및 전직 생체내 준비의 다양한 사용되지만, 우리는 Xenopus laevis의 tadpoles에 사용하기 위해이 기술을 최적화합니다. 이 동영상이 문서에서 우리는 세부 흰둥이 Xenopus 올챙이의 손상 뇌 내의 뉴런에 형광 염료 또는 플라스미드 DNA의 SCE에 대한 절차를. 우리는 또한 수율을 최적화하기위한 방법을 논의하고, 찬란 SCE에 의해 분류 뉴런의 사는 두 개의 광자 형광 이미징의 예를 보여줍니다.
Protocol
Discussion
단일 셀 electroporation (SCE)는 유전자 기능을 결정하고 타겟 유전자 조작을 수행하기위한 강력한 도구입니다. 흰둥이 올챙이의 투명성과 두뇌의 접근이 이상적으로 살아있는 유기체 내에서 성장과 세포의 연결 이벤트를 시각화에 적합한이 모델 시스템을합니다. SCE는 단일 신경 세포의 성장의 시각화를 허용하고, 그렇지 않으면 변형 두뇌 속에 휴대 자율 조작을 수행할 수 있습니다. 이 동영상이 문서 Xenopus laev…
Acknowledgements
저자는 SCE micromicropipette 팁의 전자 현미경 이미지에 대한 미숙 신경 세포와 데릭 던필드의 시간 경과 영화 캡처 성장을위한 Sharmin Hossain 감사합니다.
Riferimenti
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