Deze video laat zien hoe menselijke embryonale stamcellen (hESC 's) groeien op muis embryonale fibroblasten (MEF) feeder-cellen. Deel 1 van 3.
Abstract
Deze video laat zien hoe menselijke embryonale stamcellen (hESC 's) groeien op muis embryonale fibroblasten (MEF) feeder-cellen.
Protocol
Splitsen van menselijke embryonale stamcellen (hESC 's) uitgeplaat op muis embryonale fibroblasten (MEF) Meestal een confluente hESC plaat kan worden gesplitst 1u06-01u10, afhankelijk van de specifieke hESC lijn. De splitsing plaat zal weer samenvloeiing 5-7 dagen na het splitsen. Twee dagen voor de splitsing, gelatineren platen met behulp van een 0,1% gelatine-oplossing. Voor een 6-wells plaat, voeg 2 ml in elk putje en incubeer plaat in een 37 ° C, 5% CO 2 weefse…
Discussion
Deze video laat zien hoe menselijke embryonale stamcellen (hESC 's) groeien op muis embryonale fibroblasten (MEF) feeder-cellen. In de laatste stap vóór plating, wanneer de hESC 's zijn geresuspendeerd, moeten zij worden van ongeveer uniform kolonie grootte en vorm. Voorzichtig pipet de hESC vering op en neer een paar keer om de kolonies kleiner en meer uniform, maar niet zo veel, dat enkele cellen of zeer kleine kolonies zijn generated.Immunofluorescence vlekken en microscopie of flowcytometrie voor hESC pluripotentie markers, zo…
Acknowledgements
Menselijke embryonale stamcellen studies in de Teitell lab worden ondersteund door een Californische Instituut voor Regeneratieve Geneeskunde (CIRM) Seed Grant RS1-00313. Wij danken de leden van de globale Centrum voor Regeneratieve Geneeskunde en Stamcelonderzoek aan de UCLA, in het bijzonder Dr Amander Clark, Dr Jerome Zack, en leden van de UCLA Broad Institute Stem Cell Core Facility voor hun steun aan onze studies.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.Science . 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).