Von MEFs auf Matrigel I: Die Passage hESCs in Gegenwart von MEFs
Summary
Dieses Video zeigt, wie menschliche embryonale Stammzellen (hES) am embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF) Feeder-Zellen wachsen.
Abstract
Dieses Video zeigt, wie menschliche embryonale Stammzellen (hES) am embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF) Feeder-Zellen wachsen.
Protocol
Discussion
Dieses Video zeigt, wie menschliche embryonale Stammzellen (hES) am embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF) Feeder-Zellen wachsen. In den letzten Schritt vor dem Plattieren, wenn die hESCs resuspendiert sind, sollten sie von rund einheitlichen Kolonie Größe und Form sein. Sorgfältig Pipette die hESC Aufhängung oben und unten ein paar Mal um die Kolonien kleiner und gleichmäßiger, aber nicht so viel, dass einzelne Zellen oder sehr kleine Kolonien generated.Immunofluorescence Färbung und Mikroskopie oder Durchflusszytometrie für hESC Plur…
Acknowledgements
Menschliche embryonale Stammzellen-Studien in der Teitell Labor werden von einem California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Saatgut gewähren RS1-00313 unterstützt. Wir danken Mitglieder der Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research an der UCLA, vor allem Dr. Amander Clark, Dr. Jerome Zack, und die Mitglieder des UCLA Broad Institute Stem Cell Core Facility für ihre Unterstützung unserer Studien.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
Riferimenti
- Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts. Science . 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
