लाइट के पूरे सेल रिकॉर्डिंग रेटिना स्लाइस में उत्तेजक Synaptic धाराओं पैदा
Summary
यह वीडियो जलीय बाघ समन्दर की रेटिना टुकड़ा में पूरे सेल वोल्टेज क्लैंप रिकॉर्डिंग की प्रक्रिया से पता चलता है. हम टुकड़ा के रूप में कैसे रेटिना के दृश्य उत्तेजना के दौरान प्रदर्शन करने के लिए पैच दबाना रिकॉर्डिंग के रूप में अच्छी तरह से तैयारी प्रदर्शित करता है.
Abstract
हम पूरे सेल पैच दबाना तकनीक का उपयोग करने के लिए synaptic circuitry रेटिना में है कि underlies दृश्य सूचना संसाधन अध्ययन. इस वीडियो में, हम आपको रेटिना टुकड़ा तैयारी में प्रकाश पैदा व्यक्ति की कोशिकाओं की धाराओं के पूरे सेल रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने की प्रक्रिया के माध्यम से मार्गदर्शन करेगा. हम एक पशु मॉडल के रूप में जलीय बाघ समन्दर का उपयोग करें. हम आंख के विच्छेदन का वर्णन से शुरू करते हैं और शो कैसे स्लाइस electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए बढ़ रहे हैं. एक बार टुकड़ा रिकार्डिंग कक्ष में रखा गया है, हम प्रदर्शन कैसे पूरे सेल वोल्टेज क्लैंप रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए. हम तो टुकड़ा में photoreceptors पर दृश्य stimuli करने के लिए प्रकाश पैदा वर्तमान प्रतिक्रियाओं प्रकाश में लाना परियोजना. रिकॉर्डिंग के दौरान हम औषधीय एजेंटों के साथ टुकड़ा perfuse, जिससे एक 8 – चैनल प्रणाली छिड़काव हमें जल्दी से अलग एजेंटों के बीच स्विच करने के लिए अनुमति देता है. रेटिना टुकड़ा तैयारी रेटिना में व्यापक रूप से है पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया, विशेष रूप से अध्ययन करने के लिए amacrine या द्विध्रुवी कोशिकाओं, जो माउंट पूरी तैयारी में सुलभ नहीं हैं.
Protocol
Discussion
लाभ:
- सभी प्रकार की कोशिकाओं सुलभ हैं
- सेल प्रकार की आसान पहचान, विशेष रूप से अगर एक फ्लोरोसेंट रंजक इलेक्ट्रोड समाधान के लिए जोड़ा जाता है
- औषधीय एजेंटों को आसानी से लक्ष्य कोशिकाओं तक पहुँच सक?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Multiclamp 700A | Patch Clamp Amplifier | Molecular Devices | ||
| SZX9 | Dissection Micropscope | Olympus | ||
| BX50WI | Upright Microscope | Olympus | Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp | |
| P-97 | Micropipette Puller | Sutter Instruments | ||
| Lucivid | Microscope image injector | Mbf bioscience | ||
| 8-channel perfusion system | Microperfusion | Parker Hannfin corporation | ||
| Bits++ | Digital Video Processor | Cambridge Research Systems | ||
| Infrared Oculars | Altro | ITT | ||
| Adhesive silicone wells | Altro | Molecular Probes | 20mm diameter, 1.0mm deep | |
| Membrane Filters | Filter | Milipore | HAWPO1300 | .45µm HA |
| Borosilicate Glass Capillaries | Electrode glass | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
| Syringe Filters | Filter | Whatman | 6789-0402 | 4mm filters, .2um Nylon Membrane, Polypropylene housing |
| IR camera | Micropscope mounted camera | Sony | SPT-M324 | Extrawave HAD, B7W video camera |
| Picrotoxin | Reagent | Sigma | P1675 | |
| Strychnine | Reagent | Sigma | S0532 | |
| Imidazole-4-acetic acid sodium salt | Reagent | Sigma | I7013 | |
| Larval tiger salamanders | Animal | Charles E. Sullivan (Nashville, TN) |
Riferimenti
- Cook, P. B., Lukasiewicz, P. D., McReynnolds, J. S. GABA(C) receptors control adaptive changes in a glycinergic inhibitory pathway in salamander retina. Journal of Neuroscience. 20, 806-812 (2000).
- Heflin, S. J., Cook, P. B. Narrow and wide field amacrine cells fire action potentials in response to depolarization and light stimulation. Visual Neuroscience. 24, 197-206 (2007).
- Ichinose, T., Shields, C. R., Lukasiewicz, P. D. Sodium Channels in the Transient Retinal Bipolar Cells Enhance Visual Responses in Ganglion Cells. J Neurosci.. 25, 1856-1865 (2005).
