Generazione di cellule derivate dal midollo osseo dendritiche murini per l'uso in 2-fotone Imaging

Summary

Presentazione dell'antigene in organi linfatici secondari da parte delle cellule dendritiche è cruciale per l'avvio della cellula T mediata risposta immunitaria adattativa. Qui mostriamo la cultura del midollo osseo derivate le cellule dendritiche murine, di attivazione e di etichettatura per 2-fotoni imaging.

Abstract

Diversi metodi per la preparazione di cellule dendritiche murine possono essere trovati in letteratura. Qui, vi presentiamo un metodo che produce più del 85% CD11c cellule dendritiche in alta cultura che ospita il linfonodo drenante dopo iniezione sottocutanea e antigene presente a cellule T antigene specifico (vedi video). Inoltre, utilizziamo strumenti Essen Incucyte per monitorare la maturazione delle cellule dendritiche, dove, al giorno 10, la morfologia delle cellule in coltura è tipico di una cellula matura dendritiche e <85% delle cellule sono CD11chigh. Lo studio di presentazione dell'antigene nei linfonodi periferici da 2-fotone di imaging ha rivelato che ci sono tre fasi distinte di cellule dendritiche e l'interazione delle cellule T ^{1, 2.} Fase I è costituito da brevi contatti seriale tra altamente mobili cellule T antigene specifico antigene e portando le cellule dendritiche ^{1, 2.} La fase due è segnato da contatto prolungato tra antigene-specifica delle cellule T antigene e cuscinetti cellule dendritiche ^{1, 2.} Infine, di fase III è caratterizzata da cellule T distacco dalle cellule dendritiche, recuperare la motilità e l'inizio di dividere ^{1, 2.} Questo è un esempio del tipo di antigene-specifiche interazioni che possono essere analizzati da due fotoni di imaging di antigene-caricati celle dye-inseguitore etichettati cellule dendritiche.

Protocol

1) Rimuovere entrambe le ossa di femore da un topo Usare le forbici per tagliare via la dissezione dei muscoli ed esporre l'osso del femore sopra e sotto le articolazioni (ginocchio e anca). Afferrare il centro del femore con una pinzetta dissezione e taglio sopra e sotto le articolazioni di lasciare il più delle epifisi intatto possibile. Pulire i muscoli il più possibile con le forbici la dissezione di piccole dimensioni. Trasferire il femore in un piatto di RPMI. Tutte le procedure…

Discussion

Le cellule dendritiche sono mediatori chiave della risposta immunitaria e la cellula che presenta l'antigene più efficiente caratterizzato fino ad oggi. Metodi per l'uomo e topo di cellule dendritiche cultura in letteratura si differenziano per il tipo di citochine usato per influenzare lo sviluppo di diversi tipi di cellule dendritiche. In particolare, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa e IFN-gamma sono utilizzati in diverse combinazioni per produrre maturo, immaturo, infiammatorie e lo stato stazionario come il midollo osseo muri…