小学游离中脑多巴胺鼠类新生儿的细胞培养
Summary
小学分离中脑多巴胺的细胞培养允许的多巴胺神经元突触前特性的研究。它们可用于监控实时多巴胺的释放动力学和多巴胺的胞外分泌的调节蛋白/ mRNA的水平。在这里，我们将向您展示如何从这些文化灭鼠新生儿。
Abstract
允许的孤立的多巴胺神经元突触前特点从大脑中的其它全身投入研究的多巴胺神经元的原代细胞培养创造能力。在我们的实验室，我们使用这些神经元，以评估使用的碳纤维安培，以及使用定量PCR和免疫细胞化学的多巴胺相关基因和蛋白质表达水平的多巴胺的释放动力学。在这个视频中，我们将向您展示我们如何产生这些文化灭鼠新生儿。
这一过程涉及几个步骤，包括电镀皮层胶质星形胶质细胞，神经细胞的培养基由胶质基质空调，中脑新生儿的解剖，消化，提取和多巴胺神经元的电镀和神经营养因子除了，确保细胞的存活。
应用适合这样的准备，包括电生理学，免疫细胞化学，定量PCR，视频显微镜（即实时与质膜融合水泡），细胞活力检测和其他毒理学屏幕。
Protocol
制备前文化 注 ：**神经胶质细胞，必须提前做好，让他们有时间，增殖和覆盖的菜肴底部镀。对于非典型的或实验的遗传背景的小鼠，确保胶质细胞和神经元的文化相匹配的基因型。 注 ：** 1-7天前清扫，准备好新鲜的神经介质，并取代在用2ml的菜的胶质介质。 注 ：**在清扫前的一天，以下项目需要紫外光下过夜…
Discussion
这里所描述的方法，让精细的分辨率在全身或可在体内的方法，否则不中枢多巴胺神经元的形态和神经化学物质的功能。
Acknowledgements
这项工作是支持DK065872（ENP），一个卓越的史密斯家庭基金会在生物医学研究奖（ENP），F31 DA023760（BMG，ENP）和P30 NS047243（塔夫茨大学神经科学研究中心）。
Riferimenti
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
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Tags
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Citazione di questo articolo
Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates. J. Vis. Exp. (21), e820, doi:10.3791/820 (2008).