Questo video dimostra come mantenere la crescita delle cellule staminali embrionali umane (hESC) in cellule di alimentazione priva di condizioni e modalità di continuo passaggio in hESC alimentatore cellulare senza condizioni. Conferma di hESC pluripotenza delle cellule coltivate in alimentatore senza condizioni al microscopio immunofluorescenza è anche dimostrata. Parte 3 di 3.
Abstract
Questo video dimostra come mantenere la crescita delle cellule staminali embrionali umane (hESC) in cellule di alimentazione priva di condizioni e modalità di continuo passaggio in hESC alimentatore cellulare senza condizioni. Conferma di hESC pluripotenza delle cellule coltivate in alimentatore senza condizioni al microscopio immunofluorescenza è anche dimostrata.
Protocol
HESC scissione da Matrigel a Matrigel Di solito un confluenti 6 pozzetti di hESC su Matrigel possono essere divisi 1:03-01:05 ad un altro piatto Matrigel, con i pozzi di diventare confluenti ancora 4-5 giorni dopo la divisione. CM e le piastre Matrigel sono preparati come descritto in precedenza prima di sciogliersi. Il giorno della scissione, lavare i pozzetti per la scissione con 1 × PBS, pH7.4, aggiungere 1 ml di 1mg/ml dispasi (soluzione madre diluita 5mg/ml con DME…
Discussion
Questa serie di 3 video dimostra come far crescere cellule staminali embrionali umane (hESC) su fibroblasti embrionali di topo (MEF), le cellule di alimentazione (video 1), come passaggio a Matrigel cell-free alimentatore piastre (video 2), e come mantenere hESC da passaging in alimentatore Matrigel condizioni cell-free (video 3). Numerosi studi precedenti hanno mostrato che il mantenimento della vitali, hESC indifferenziato richiede cultura sulle cellule inattivate alimentatore MEF. Tuttavia, per molti esperimenti, una popolazione pura di …
Acknowledgements
Embrionali umane studi sulle cellule staminali in laboratorio Teitell sono supportati da una California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) sementi concedere RS1-00313. Ringraziamo i membri del Centro di Medicina Rigenerativa Broad e ricerca sulle cellule staminali presso la UCLA, in particolare il Dott. Amander Clark, il Dr. Jerome Zack, e membri del Fondo per la UCLA Stem Cell Institute Broad core per il loro sostegno dei nostri studi.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .Science. 282, 1145-1147 (1998).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e832, doi:10.3791/832 (2008).