이 동영상은 피더 세포가없는 조건에서 어떻게 피더에서 연속 통과 hESCs 세포가없는 조건에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)의 성장을 유지하는 방법을 보여줍니다. hESC의 확인은 pluripotency immunofluorescence 현미경으로 피더 셀없는 조건을 재배도 증명됩니다. 3 부 3.
Abstract
이 동영상은 피더 세포가없는 조건에서 어떻게 피더에서 연속 통과 hESCs 세포가없는 조건에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)의 성장을 유지하는 방법을 보여줍니다. hESC의 확인은 pluripotency immunofluorescence 현미경으로 피더 셀없는 조건을 재배도 증명됩니다.
Protocol
Matrigel에서 Matrigel을 분리 hESCs 보통 Matrigel에 hESCs의 합류 6 잘 판은 우물이 4-5일 분리 후 다시 합류되기와 다른 Matrigel 판에 1시 5분에서 1시 3분까지 분할 수 있습니다. 분할하기 전에 위에서 설명한 CM과 Matrigel 플레이트는 준비가되어 있습니다. 분할 당일, × 1 분리를위한 PBS, pH7.4를 각각 잘 씻어 각각 잘하는 1mg/ml Dispase (DMEM/F12 매체와 희석 5mg/ml 재고 솔루션)의 …
Discussion
3 동영상이 시리즈는 (MEF) 피더 세포 (비디오 1) 어떻게 통로를 피더 셀 – 무료 접시 (비디오 2) Matrigel을하고, 방법을 유지하기 위해 마우스 배아 fibroblast에서 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다 Matrigel 피더 셀 무료 조건 (동영상 3) passaging하여 hESCs. 많은 이전의 연구는 실용적, undifferentiated hESCs의 유지 보수가 inactivated MEF 피더 세포에 대한 문화를 필요로했다. 그러나 대부분의 실험, 피더 세?…
Acknowledgements
Teitell 연구실에서 인간 배아 줄기 세포 연구는 재생 의료에 대한 캘리포니아 연구소 (CIRM) 씨앗 부여 RS1 – 00313에 의해 지원됩니다. 우리는 UCLA, 특히 박사 Amander 클라크 박사 제롬 잭, 우리의 연구들의 지원 UCLA 브로드 연구소 줄기 세포 핵심 시설의 멤버에 재생 의료 및 줄기 세포 연구의 브로드 센터의 회원을 감사드립니다.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .Science. 282, 1145-1147 (1998).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e832, doi:10.3791/832 (2008).