स्थिर ट्रांसजेनिक सी. Microinjection का उपयोग एलिगेंस पीढ़ी
Summary
इस वीडियो सी एलिगेंस जननपिंड ट्रांसजेनिक जानवर बनाने में microinjection की तकनीक को दर्शाता है.
Abstract
ट्रांसजेनिक Caenorhabditis एलिगेंस जननपिंड 1 में एक डीएनए प्लाज्मिड समाधान के microinjection के माध्यम से आसानी से बनाया जा सकता है . प्लास्मिड डीएनए के लिए extrachromosomal concatamers कि stably कर रहे हैं, हालांकि वास्तविक 2 गुणसूत्रों के रूप में एक ही दक्षता के साथ विरासत में मिली नहीं फार्म rearranges. ब्याज की एक जीन है rol-6 या GFP के रूप में एक स्पष्ट प्ररूपी मार्कर के साथ सह इंजेक्शन, एक विदारक माइक्रोस्कोप के अंतर्गत ट्रांसजेनिक जानवरों के चयन की अनुमति है. exogenous जीन सेलुलर स्थानीयकरण अध्ययन के लिए अपने देशी प्रमोटर से व्यक्त किया जा सकता है. वैकल्पिक रूप से, transgene है कि विशेष रूप से सेल या ऊतकों में जीन उत्पाद की भूमिका का आकलन करने के लिए एक अलग विशिष्ट ऊतक प्रमोटर द्वारा संचालित किया जा सकता है है. इस तकनीक कुशलतापूर्वक germline या जल्दी 3 भ्रूण के अलावा सी एलिगेंस के सभी ऊतकों में जीन की अभिव्यक्ति ड्राइव. ट्रांसजेनिक जानवरों के निर्माण में व्यापक रूप से प्रयोगात्मक मानदंड की एक श्रृंखला के लिए उपयोग किया जाता है. यह वीडियो microinjection ट्रांसजेनिक कीड़े उत्पन्न प्रक्रिया को दर्शाता है. इसके अलावा, चयन और स्थिर ट्रांसजेनिक सी एलिगेंस लाइनों के रखरखाव में वर्णित है.
Protocol
Discussion
जब इस प्रक्रिया कर रही है, यह महत्वपूर्ण है को याद है:
– जननपिंड के केंद्र में सीधे इंजेक्षन
– बहुत ज्यादा तरल नहीं इंजेक्षन
– जल्दी काम करने के लिए dessication को रोकने.
यदि आप सुई, इस तरह के रूप में यह बहुत बड़ी ?…
Acknowledgements
हम सभी काल्डवेल लैब के सदस्यों के सहकारी भावना को स्वीकार चाहते हैं. आंदोलन विकारों अनुसंधान प्रयोगशाला में dystonia Bachmann – स्ट्रॉस और पार्किंसंस फाउंडेशन, संयुक्त पार्किंसंस फाउंडेशन, अमेरिकी पार्किंसंस रोग एसोसिएशन, अलबामा के पार्किंसंस रोग एसोसिएशन, माइकल जे फॉक्स फाउंडेशन पार्किंसंस अनुसंधान के लिए, और एक अंडर ग्रेजुएट रिसर्च द्वारा समर्थित किया गया है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agarose | Ultrapure | Invitrogen | 15510-027 | |
| Halocarbon Oil, Voltalef | Hulle 10S | elfatochem, France | ||
| Coverglass 18×18 mm | Fisher | 12-548-A | ||
| Coverglass 20×30 mm | Fisher | 12-548-5A | ||
| Coverglass 22×50 mm | Fisher | 12-545-E | ||
| 100 ul Capillary | VWR | 53432-921 | ||
| Glass Capillary for Needles | “Kwik-Fil” | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Needle Puller | Tool | Narishige | Model PP-830 | |
| microINJECTOR System | Tritech Research | MINJ-1000 | Scope, Stage, Manipulator | |
| Dissecting, with Fluorescence | Microscope | Nikon | SMZ800 | |
| Dissecting | Microscope | Nikon | SMZ645 |
References
- Stinchcomb, D. T., Shaw, J. E., Carr, S. H., Hirsh, D. Extrachromosomal DNA transformation of Caenorhabditis elegans. Mol. Cell. Biol. 5, 3484-3496 (1985).
- Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO J. 10, 3959-3970 (1991).
- Kelly, W. G., Xu, S., Montgomery, M. K., Fire, A. Distinct requirements for somatic and germline expression of a generally expressed Caenorhabditis elegans gene. Genetics. 146, 227-238 (1997).
- Cao, S., Gelwix, C. C., Caldwell, K. A., Caldwell, G. A. Torsin-mediated neuroprotection from cellular stresses to dopaminergic neurons of C. elegans. J Neurosci. 25, 3801-3812 (2005).
- Caldwell, G. . Integrated Genomics: A Discovery-Based Laboratory Course. , (2006).
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
