Быстрая Техника для визуализации живых иммобилизованных клеток дрожжей

Summary

Быстрый метод для визуализации растущего иммобилизованных клеток дрожжей, здесь применяется к флуоресцентным журналистам на молчание спаривания локусов HML и HMR

Abstract

Мы приведем здесь простой, быстрый и очень гибкий метод для иммобилизации и визуализации растущего дрожжевых клеток путем epifluorescence микроскопии. Техника одинаково хорошо подходит для визуализации статических популяций дрожжей, или время курсы экспериментов до десяти часов в длину. Мой микроскопии расследует эпигенетической наследственности на молчание локуса спаривания в CEREVISIAE С.. Есть два молчание локуса спаривания, HML и HMR, которые обычно не выражены, как они упакованы в гетерохроматин. В sir1 мутант глушителей фоне ослабленной, что каждый локус может быть как в явной или замолчать эпигенетические состояния, так и в популяции в целом есть смесь клеток разных эпигенетические состояния для обоих HML и HMR. Мой микроскопия показала, что нет никакой связи между эпигенетические состояния HML и HMR в отдельной клетки. sir1 клетки стохастически переключатель эпигенетические состояния, установление глушителей на ранее высказанные очага или выражения ранее замолчать локуса. Мое время курс микроскопии гусеничных отдельных sir1 клетки и их потомство, чтобы выиграть частоты каждого из четырех возможных эпигенетические выключатели, и, следовательно, стабильность каждого из эпигенетических государств в sir1 клеток. См. также Xu и соавт., Мол. Сотовые 2006 года.

Protocol

Иммобилизованные клетки на время микроскопии epifluorescence конечно. Пожалуйста, обратите внимание, что этот протокол используется только если объективы вашего микроскопа ниже столик микроскопа. Место клеток в нужной концентрации в жидких средах на длинном покровное (примерно 24x50mm) <b…

Discussion

Это быстрый метод, который парализует клетки дрожжей то же время позволяя роста. Мы проследили рост дрожжей на срок до десяти часов, с дрожжами отображения дикие ставки разделения типа в течение всего эксперимента. Заметим, что эта установка требует объектива должны быть ниже столик микроскопа.