一个现场的固定化酵母细胞可视化的快速技术

Summary

一个快速增长的固定化酵母细胞的可视化技术，在这里沉默交配位点HML和HMR的荧光灯记者

Abstract

我们在座的一个epifluorescence显微镜日益增长的酵母细胞固定化和可视化的简单，快速，和极其灵活的技术。该技术同样适用于静态的酵母种群，或时间制课程实验达10个小时的长度可视化。我的显微镜调查在沉默交配基因在酿酒酵母中的后生继承。有两个位点的沉默交配，HML和HMR的，通常不会表达，因为它们是在异包装的。在sir1突变的背景沉默减弱等，每个座位可以表达或沉默的后生状态，所以在人口作为一个整体有一个HML和HMR的后生国家不同的细胞混合。我的显微镜证明在单个细胞之间的HML和HMR的后生状态，没有关系。 sir1细胞随机开关后生国家，建立在先前表示的轨迹沉默或表达了先前沉默的轨迹。我的时间当然显微镜跟踪个人sir1细胞和他们的后代将比分四种可能的后生开关频率，因此每个sir1细胞后生国家的稳定。也许等。分子。细胞2006年。

Protocol

时间当然epifluorescence显微镜固定化细胞。请注意，这个协议是唯一有用的，如果您的显微镜物镜低于显微镜阶段。 在液体介质中的浓度所需的位置细胞长盖玻片（大约24x50mm） 切割的一种人工合成的介质板（这些具有较低的自体荧光）和地点在细胞所需的大小的琼脂块。广场一侧的镊子处理与细胞接触的琼脂块。 对于较短时间的课程（最多3个小时），这个成立…

Discussion

这是一种快速的技术，无法移动，酵母细胞中，而仍然允许增长。我们遵循长达十几个小时的酵母生长，与酵母在整个实验过程中显示野生型分工率。请注意，此安装需要的物镜显微镜下面的阶段。