En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller
Summary
En snabb teknik för visualisering av växande immobiliserade jästceller, här gäller för fluorescerande reportrar på den tysta parning lokus HML och HMR
Abstract
Vi presenterar här en enkel, snabb och extremt flexibel teknik för immobilisering och visualisering av växande jästceller av epifluorescence mikroskopi. Tekniken passar lika bra för visualisering av statisk jäst populationer eller tidsförlopp experiment upp till tio timmar långa. Min mikroskopi undersöker epigenetiska arv vid den tysta parning loci i S. cerevisiae. Det finns två tysta parning loci, HML och HMR, som normalt inte uttrycks som de är förpackade i heterochromatin. I sir1 muterade bakgrunden ljuddämpning är försvagad så att varje lokus antingen kan vara i uttrycks eller tystade epigenetiska tillstånd, så i befolkningen som helhet finns en blandning av celler av olika epigenetiska stater för både HML och HMR. Min mikroskopi visade att det inte finns något samband mellan den epigenetiska tillstånd HML och HMR i en enskild cell. sir1 celler växla stokastiskt epigenetiska tillstånd, inrättande tysta vid ett tidigare uttryckt locus eller uttrycker en tidigare tystade lokus. Min tid naturligtvis mikroskopi spåras enskilda sir1 celler och deras avkomma att göra poäng frekvensen i varje av de fyra möjliga epigenetiska strömbrytare, och därmed stabiliteten i varje epigenetiska stater i sir1 celler. Se även Xu et al. Mol. Cell 2006.
Protocol
Discussion
Detta är en snabb teknik som immobilizes jästceller samtidigt tillåta tillväxt. Vi har följt jäst tillväxt för upp till tio timmar, med jästen som visar vilda priser typ divisionen under hela försöksperioden. Observera att denna inställning kräver att objektivet ligga under mikroskop scenen.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi vill tacka Pete Houston och Eugenia Xu för all hjälp.
Riferimenti
- Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).
