В этой статье мы показали, как рассекают центральной нервной системы с третьего возраста личинок дрозофилы.
Abstract
Центральной нервной системы (ЦНС), личинок дрозофилы является сложным и плохо изучены. Один из способов исследовать ЦНС является использование иммуногистохимии для изучения экспрессии различных романа и маркеров белков. Окрашивание целом личинки нецелесообразно, так как жесткие кутикулы предотвращает антител от проникновения внутрь полости тела. Для того, чтобы пятно этих тканей необходимо препарировать животное до фиксации и окрашивания. В этой статье мы показали, как рассекают дрозофилы личинки без повреждения ЦНС. Начните с разрывая личинки пополам с парой тонких щипцов, а затем включите кутикулы "наизнанку", чтобы разоблачить ЦНС. Если вскрытие производится тщательно ЦНС будет оставаться прикрепленной к кутикуле. Мы обычно держат ЦНС придается кутикулы всей фиксации и окрашивания шагов, и только полностью удалить ЦНС от кутикулы незадолго до монтажа образцов на предметных стеклах. Мы также покажем некоторые характерные образы личиночной ЦНС витражи с Евой, транскрипционный фактор выражается в подмножество нейронов в ЦНС. Статья завершается обсуждением некоторых практических применений этой техники и возможные трудности, которые могут возникнуть.
Protocol
Рассеките 3-го возраста личинки, оставляя ЦНС придается кутикулы. Место в 1,5 мл трубки. Зафиксируем в PBS (1x), содержащий 2% формальдегида в течение 40 мин с качалки. ; Использование 250ul за каждые 5-10 расчлененный ЦНС. Удалить формальдегида и кратко промыть 3 раза PBS + 0,1% Тритон Х-100 (PBST). Ис?…
Discussion
Это видео демонстрирует, как вскрыть ЦНС из третьих личинки дрозофилы возраста. После вскрытия, ЦНС могут быть окрашены с использованием стандартного протокола иммуногистохимии. В настоящее время, многое до сих пор неизвестно о том, как взрослые нервной системы создается, а также как он хранит и п…