Dissekering av Larvernas CNS i Drosophila melanogaster
Summary
I den här artikeln visar vi hur du kan dissekera det centrala nervsystemet från tredje INSTAR Drosophila larver.
Abstract
Det centrala nervsystemet (CNS) av Drosophila larver är komplex och dåligt förstådd. Ett sätt att undersöka CNS är att använda immunohistokemi för att undersöka uttrycket av olika nya och proteiner markör. Färgning av hela larver är opraktiskt eftersom den tuffa nagelbanden hindrar antikropparna från att tränga in i kroppen hålighet. För att färga dessa vävnader är det nödvändigt att dissekera djuret före fastställande och färgning. I den här artikeln visar vi hur du kan dissekera Drosophila larverna utan att skada nervsystemet. Börja med att riva larven på mitten med ett par fina tång, och slå sedan på nagelband "inside-out" för att avslöja CNS. Om dissektionen utförs noggrant CNS kommer att förbli knuten till nagelbanden. Vi håller oftast CNS knutna till nagelbanden hela fixering och färgning steg, och bara helt ta bort CNS från nagelbanden strax innan montering av prover på objektglas. Vi visar också några representativa bilder av en larver CNS färgas med Eva, en transkriptionsfaktor som uttrycks i en delmängd av nervceller i CNS. Artikeln avslutas med en diskussion av några av de praktiska användningsområden för denna teknik och de potentiella svårigheter som kan uppstå.
Protocol
Discussion
Denna video visar hur du dissekera CNS från tredje INSTAR Drosophila larver. Efter dissektion kan CNS färgas med en vanlig immunohistokemi protokoll. För närvarande mycket är fortfarande okänt om hur vuxna nervsystemet skapas samt hur den lagrar och överför information. Studier av utvecklingen av Drosophila larver CNS bör öka vår kunskap om nervsystemets ledningar och funktion.
Drosophila larver uppvisar ett antal stereotpyed beteenden, som ett svar på miljö-signaler. Hur är dessa beteenden lärda och lagras i nervsyst…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| forceps | fine tipped | |||
| 9-well watch glass | ||||
| plastic petri dish |
Riferimenti
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128. , 1899-1909 (2001).
