人类胚胎干细胞：启动文化冷冻细胞

Summary

在这里，我们证明，我们的实验室如何从冻结的股票开始一个色调的人类胚胎干细胞线文化。

Abstract

在这里，我们证明，我们的实验室如何从冻结的股票开始一个色调的人类胚胎干细胞线文化。首先，一到两个大约10厘米板（两个）万元照射的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层细胞与色调媒体冲洗以去除残留的血清和细胞碎片，然后色调媒体和左在细胞内平衡培养。一个长期的液态氮储存或A – 80C冷冻细胞冷冻小瓶来源，并迅速淹没37C水浴中快速解冻的。在冻结媒体的细胞，然后从小瓶中删除，并放入大量的色调媒体。大量的色调媒体有助于去除多余的血清和DMSO，这可能会导致色调人类胚胎干细胞分化。悬浮细胞轻轻地分离出来，然后重新悬浮在一个体积小，新鲜的色彩，然后用种子的MEF板媒体。它被认为是重要的种子的MEF板轻轻下拉明智的方式加入的色调细胞均匀地分散在整个板块。新成立的色调培养板孵化器的媒体取代之前48小时内返回，然后是美联储此后每隔24小时。

Protocol

从冻结的股票解冻： 在解冻色调细胞之前，请确保您已经做好准备，MEF板是正确镀状况良好。 不要尝试用一个较理想的板，或者是3天以上 。 建议前所有锥形管和井正在使用的标签 。 </span…

Discussion

在这段视频中，我们将展示我们的实验室如何经常从冻结的股票建立一个色调的人类胚胎干细胞培养。这个过程是适合一般使用任何哺乳动物的细胞，如果在DMSO溶液冷冻。高效解冻是必不可少的，建立一个新的文化色调从冻结的股票细胞和实验的一致性很重要。

Materials

HuES media 651.5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml Glutamin 6.5 ml NEAA 6.5 ml beta-mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml