Il monitoraggio dei livelli del neurotrasmettitore extracellulare nelle regioni cerebrali distinte di muoversi liberamente animali offre approfondimenti sul legame tra il rilascio dei neurotrasmettitori e comportamento. In microdialisi in vivo accoppiato con rilevazione elettrochimica fornisce anatomica eccellente e la risoluzione chimici e informazioni su come neurotrasmissione basale è alterato da manipolazioni farmacologiche o fisiologiche.
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Articolo metodologico
Survivable Chirurgia Stereotassica in roditori
In questo articolo
Sommario
Abstract
La capacità di misurare i livelli basali extracellulari di neurotrasmettitori nel cervello di animali svegli permette per la determinazione degli effetti di diverse sfide sistemiche (farmacologici o fisiologico) al sistema nervoso centrale. Per esempio, si può misurare direttamente come proiezioni dopamina dell'animale mesencefalo rispondere a rilascio di dopamina farmaci come gli stimoli d-anfetamina o naturale come il cibo. In questo video vi mostriamo come impianto cannule guida targeting siti specifici nel cervello del ratto, come inserire e impiantare una sonda microdialisi e come utilizzare cromatografia liquida ad alta prestazione accoppiata con rilevazione elettrochimica (HPLC-EC) per misurare i livelli extracellulari di neurotrasmettitori ossidabili e metaboliti. Locali introduzione preciso dei farmaci attraverso la sonda di microdialisi permette di raffinato lavoro sulle specificità del sito in un composto s meccanismo di azione. Questa tecnica è eccellente e la risoluzione anatomica chimiche, ma solo i tempi di risoluzione modesta come campioni microdialisi sono di norma elaborata ogni 20-30 minuti per assicurare i livelli di neurotrasmettitore rilevabili. Strumenti complementari ex vivo (cioè fetta e coltura cellulare elettrofisiologia) può aiutare con il monitoraggio in tempo reale la neurotrasmissione.
Protocollo
Riassunto
Due mesi di età media di topi C57BL/6J età o equivalente o tre mesi età media ratti Sprague Dawley o equivalenti sono anestetizzati con ketamina (60 mg / kg ip per i ratti; 100 mg / kg ip per topi) e xilazina (10 mg / kg, ip per entrambe le specie). La sedazione è controllata mediante un pizzico dolce toe ritirare riflesso dimostrato in Walantus et al. (Giove, 6, 2007) e Szot et al. (Giove, 9, 2007). Termoregolazione può essere fornita attraverso una piastra elettrica thermostatregulated (ALA Instruments Inc.) e monitorati attraverso un termometro rettale. La testa è rasat....
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Discussione
Microdialisi in vivo è lo strumento di scelta per la misurazione dei neurotrasmettitori multipli e metaboliti in siti diversi del cervello di un animale vivo. Tuttavia, controlla solo i livelli extracellulari di sostanze neurochimiche e non offre la risoluzione temporale di monitorare esocitosi dei neurotrasmettitori in tempo reale. Attraverso una versione della tecnica chiamata "net-flux", la concentrazione dei neurotrasmettitori effettiva in un determinato sito può essere calcolato, che a loro volta possono dare misurazioni accu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Supportato da DK065872 (PEV), una famiglia Smith Award Foundation di eccellenza nella ricerca biomedica (PEV), F31 DA023760.
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Materiali
I materiali sono descritti nel documento protocollo
Riferimenti
- Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma. J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).
- Chen, K. C.
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Ristampe e permessi
