P0 Yenidoğan Ratlarda Hipokampal Nöronlar İlköğretim Kültür

Summary

Diseksiyon ve bireyin beyin bölgesi hücrelerinin büyüme, hücresel ve fizyolojik parametrelere soruşturma kolaylaştırır. Biz nöron zenginleştirilmiş serum serbest bir ortamda kültürler üretir primer hücre kültür için bir metodu tanımlar.

Abstract

Hipokampal nöronların fizyolojik özellikleri, yaygın olarak, özellikle öğrenme ve hafıza hipokampus katılımı nedeniyle incelenmiştir. İlköğretim hipokampal hücre kültür Nörobilimadamları bireysel hücre ve tek sinaps düzeyinde nöronların aktivitesi ve özelliklerini incelemek için olanak sağlar. Bu video, yeni doğan sıçanlardan alınan primer hipokampal hücreler izole ve büyümek nasıl göstereceğiz. Hipokampus, 2-3 dakika gibi kısa bir her yeni doğan hayvan izole edilmesi ve kültürleri iki hafta kadar devam edebilir. Biz de kısaca bu hipokampal nöronlar oranlı metrik kalsiyum görüntüleme için nasıl kullanılacağını göstermektedir. Bu protokol, hipokampus için süreci tarif ederken, hiçbir değişiklik küçük beynin diğer bölgelerine uygulanabilir.

Protocol

Hipokampal izolasyon önce Hipokampal izolasyon başlamadan önce tüm araçları steril olduğundan emin olun. % 70 etanol ile kültür başlığı aşağı Sprey, kaputun içindeki araçları. 10 cm Petri kapları, steril poli-L kaplı cam lamelleri, Pipet ve ipuçları, tek kullanımlık pipetler ve elektrikli bir pipet ve – 6 gerekecektir. Bu noktadan itibaren, doğru steril tekniği kullanmayı unutmayın. Açın ve su banyosunda 37 ° C'ye kadar ısıtılır olduğunu emi…

Discussion

Bu protokol bir değişiklik Gary Banker ve Kim Goslin ¹ yeni ufuklar açan bir çalışma olarak geliştirilmiştir . Bu kitap hücreleri kültür ilgilenen herkes için vazgeçilmez bir kaynak sadece nöron zenginleştirilmiş kültürler geçerli protokol açıklanan.

Hücre kültür en önemli üç faktör vardır: kısırlık, hız, orta seçim.

Laminar akış / Sterilite – steril kaput, aseptik şartlarda, steril bir inkübatör gereklidir. Kirlilik her adımda sadece üzerinde çalışmakta…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046