从P0新生大鼠海马神经元的原代培养
Summary
解剖和个人的大脑区域的细胞的生长，促进细胞和生理参数的调查。我们描述了一个初级细胞培养的方法，在无血清环境产生的神经元丰富的文化。
Abstract
通常调查海马神经元的生理特性，特别是由于在学习和记忆的海马的参与。海马细胞培养，允许神经学家研究在单个细胞和单突触水平的神经元的活动和属性。在这段视频中，我们将演示如何隔离和成长从新生大鼠海马细胞。海马可能是孤立的，从每个新生动物在短短2至3分钟，和文化可以保持长达两个星期。我们还将简要演示了如何使用这些海马神经元的比例钙成像。虽然这一协议描述为海马的过程中，几乎没有修改，它可以被应用到大脑的其他地区。
Protocol
此前海马隔离海马隔离开始之前，确保所有的工具是无菌的。喷雾用70％乙醇的文化的油烟机，并置于罩内的工具。您将需要6 – 10厘米的培养皿，无菌聚L镀膜玻璃盖玻片，移液器和技巧，一次性移液器，电动移液器。从这个角度上，记得要使用正确的无菌技术。 打开水洗澡，并确保它被加热到37℃ 下面的解决方案，保存在4 ° C，将需要： 改良Eagle培养基（…
Discussion
该协议被修改的开创性工作银行家加里和金Goslin 1。这本书是一个重要的资源在培养细胞有兴趣的人 – 不仅在目前的协议描述的神经丰富的文化。
细胞培养的三个最关键的因素是：不育，速度，介质的选择使用。
不育 -层流/无菌罩，无菌条件下，无菌孵化器是必需的。污染不仅不利于目前的实验工作，但也可能已计划的后续工作，在任何步骤。孵化器已被污染后，它可能需要数?…
Acknowledgements
JLN支持68347氢。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
Citazione di questo articolo
Nunez, J. Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats. J. Vis. Exp. (19), e895, doi:10.3791/895 (2008).