Primär Kultur av hippocampus nervceller från P0 nyfödda råttor

Summary

Den dissekering och tillväxt av celler från en enskild hjärna område underlättar utredning av cellulära och fysiologiska parametrar. Vi beskriver en metod för primär cellodling som producerar neuron berikade kulturer i ett serum-fri miljö.

Abstract

De fysiologiska egenskaperna hos hippocampus nervceller är ofta utreds, särskilt på grund av inblandning av hippocampus i inlärning och minne. Primär hippocampus cellodling kan neuroforskare att granska verksamheten och egenskaper av nervceller i den enskilda cellen och enda synaps nivå. I den här videon kommer vi att visa hur man isolera och odla primära hippocampus celler från nyfödda råttor. Hippocampus kan vara isolerade från varandra nyfödda djurets så kort som 2 till 3 minuter och de kulturer kan bibehållas i upp till två veckor. Vi kommer också att kortfattat visa hur du använder dessa hippocampus neuroner för ratiometrisk kalcium avbildning. Även om detta protokoll beskriver processen för hippocampus, med liten eller ingen förändring, kan den tillämpas på andra regioner i hjärnan.

Protocol

Före hippocampus isolering Innan du börjar hippocampus isolering, se till att alla verktyg är sterila. Spraya ner kultur huva med 70% etanol, och placera verktyg inne i huvan. Du behöver 6 – och 10-cm petriskålar, sterila poly-L belagt glas täckglas, pipetter och tips, engångspipetter, och en elektrisk pipett. Från och med nu, kom ihåg att använda rätt steril teknik. Sätt på vattenbad och se till att det värms upp till 37 ° C. Följande lösningar som lagra…

Discussion

Detta protokoll utvecklades som en modifikation av det nyskapande arbete Gary Banker och Kim Goslin ^1. Denna bok är en viktig resurs för alla som är intresserade odla celler – inte bara neuron-berikade kulturer som beskrivs i det nuvarande protokollet.

De tre mest kritiska faktorerna i cellodling är: sterilitet, hastighet, valet av medium som används.

Sterilitet – ett laminärt flöde / steril huva, aseptiska förhållanden, och en steril inkubator krävs. Föroreningar vid varje steg är ska…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046