Primäre Kultur des Hippocampus-Neuronen von neugeborenen Ratten P0

Summary

Die Dissektion und das Wachstum der Zellen von einem einzelnen Bereich des Gehirns erleichtert Untersuchung zellulärer und physiologischer Parameter. Wir beschreiben ein Verfahren zur Primär-Zellkultur, die Neuron-angereicherten Kulturen produziert in einem Serum-freien Umgebung.

Abstract

Die physiologischen Eigenschaften von Neuronen im Hippocampus werden häufig untersucht, vor allem wegen der Beteiligung des Hippocampus beim Lernen und Erinnern. Primäre hippocampale Zellkultur ermöglicht Neurowissenschaftler die Aktivität und Eigenschaften von Neuronen in den einzelnen Zellen und einzelne Synapse-Ebene zu untersuchen. In diesem Video zeigen wir, wie zu isolieren und zu wachsen primäre Zellen des Hippocampus von neugeborenen Ratten. Der Hippocampus kann von jedem neugeborenen Tieren in so kurz wie 2-3 Minuten isoliert werden, und die Kulturen kann beibehalten werden bis zu zwei Wochen. Wir werden auch kurz zeigen, wie diese Neuronen im Hippocampus für ratiometrische Calcium-Imaging verwenden. Während dieses Protokoll beschreibt den Prozess für den Hippocampus, mit wenig bis gar keine Änderung, kann es auf andere Regionen des Gehirns eingesetzt werden.

Protocol

Vor Hippocampus Isolation Vor Beginn der Hippocampus Isolation, um sicherzustellen, dass alle Werkzeuge, die steril sind. Spray auf der Kultur Haube mit 70% Ethanol, und legen Sie die Werkzeuge in der Motorhaube. Sie benötigen 6 – und 10-cm-Petrischalen, steril Poly-L beschichteten Deckgläsern, Pipetten und Spitzen, Einweg-Pipetten und einem elektrischen Pipette. Von diesem Punkt an, denken Sie daran, richtige sterile Technik zu verwenden. Schalten Sie das Wasserbad und stellen S…

Discussion

Dieses Protokoll wurde als eine Änderung der grundlegenden Arbeit von Gary Banker und Kim Goslin ¹ entwickelt. Dieses Buch ist eine wesentliche Ressource für alle, die Kultivierung von Zellen interessiert – nicht nur das Neuron-angereicherten Kulturen in der aktuellen Protokoll beschrieben.

Die drei wichtigsten Faktoren in der Zellkultur sind: Sterilität, Geschwindigkeit, die Wahl des Mediums verwendet.

Sterilität – eine Laminar-Flow / sterile Haube, aseptischen Bedingungen und einer sterilen …

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046