Imaging Effector geheugen T-cellen in het oor na inductie van Adoptieve DTH
Summary
Hier laten we zien een methode voor het induceren en het opnemen van de voortgang van een vertraagde type-overgevoeligheid (DTH) reactie in de rat oor. Dit wordt gevolgd door een demonstratie van de voorbereiding van de rat oor weefsel voor twee-foton beeldvorming van de effector / geheugen T-cel-respons.
Abstract
Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een immuunreactie waarbij de belangrijkste spelers zijn CCR7 – effector / geheugen T-lymfocyten. Hier tonen we een methode voor het induceren en het opnemen van de voortgang van een DTH-reactie in de rat oor. Dit wordt gevolgd door een demonstratie van de voorbereiding van de rat oor weefsel voor twee-foton beeldvorming van de CCR7 – effector / memory T-cel-respons.
Een adoptie DTH wordt geïnduceerd door de intraperitoneale injectie van GFP-gelabelde Ova-specifieke CCR7 – effector / memory T-cellijn (Beeton, C J. Gevisualiseerde Experimenten, Issue 8). Cellen worden dan toegestaan om in de rat equilibreren gedurende 48 uur vóór de uitdaging door het injecteren van een oor met een zoutoplossing (controle oor) en de andere met een 1:1 mix van eicellen en Ova geconjugeerd met Texas-Rood (Ova-TR) naar visualisatie toe van de ingezeten antigeen-presenterende cellen.
We beschrijven een methode van het weefsel voorbereiding nuttig zijn voor beeldvorming van de beweeglijkheid van de cellen in de diepe dermale laag tijdens een immuunrespons, in combinatie met visualisatie van collageen vezels door tweede harmonische generatie. Oor weefsel wordt gesneden in 5 x 5 mm vierkantjes (iets groter is beter) en gemonteerd op kunststof dekglaasjes met behulp van Vetbond ™, die vervolgens worden beveiligd met siliconenvet in een imaging kamer en superfused door zuurstof-borrelen weefselkweek medium bij 37 ° C .
Protocol
Riferimenti
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
