Imaging Effector cellule T di memoria nell'orecchio dopo l'induzione di DTH adottivi

Sommario

Qui mostriamo un metodo per indurre la registrazione e il progresso di una ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) reazione nell'orecchio ratto. Questa è seguita da una dimostrazione della preparazione di tessuto di ratto orecchio per l'imaging a due fotoni del effettrici / risposta delle cellule T memoria.

Abstract

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione immunitaria in cui i protagonisti sono CCR7 ^- effettrici / linfociti T memoria. Qui, dimostriamo un metodo per indurre il progresso e la registrazione di una reazione DTH nell'orecchio ratto. Questa è seguita da una dimostrazione della preparazione di tessuto di ratto orecchio per l'imaging a due fotoni del CCR7 ^- effettrici / risposta delle cellule T memoria.

Un DTH adottiva è indotta dalla iniezione intraperitoneale di GFP-etichettata Ova-specifiche CCR7 ^- effettrici / memoria linea cellulare T (Beeton, C J. Esperimenti Visualized, numero 8). Le cellule sono poi lasciato equilibrare nel ratto per 48 ore prima sfida, iniettando un orecchio con soluzione salina (controllo orecchio) e l'altro con una miscela 1:1 di coniugati Ova e Ova a Texas-Red (Ova-TR) per consentire la visualizzazione residente di cellule presentanti l'antigene.

Descriviamo un metodo di preparazione dei tessuti utili per l'imaging la motilità delle cellule all'interno dello strato dermico profondo durante una risposta immunitaria, in collaborazione con visualizzazione delle fibre di collagene da generazione di seconda armonica. Il tessuto viene tagliato l'orecchio in 5 x 5 millimetri quadrati (leggermente più grande è meglio), montato su slitta copertura in plastica con Vetbond ™, che sono poi protetti con grasso al silicone in una camera di imaging e superfused da ossigeno-bolle terreni di coltura a 37 ° C .

Protocollo

Induzione di DTH adottivi

Si prega di consultare l'articolo jove: induzione e monitoraggio del adottivi ipersensibilità ritardata nei ratti
Christine Beeton, George K. Chandy
Dipartimento di Fisiologia e Biofisica, University of California, Irvine
Esperimenti J. visualizzati, Numero 8

Qui, abbiamo modificato questo protocollo usando antigene (ovoalbumina), coniugata con Texas-Red in un rapporto 1:1 con l'antigene senza etichetta per consentire la visualizzazione di fagocitaria cellule presentanti l'antigene.

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