Здесь мы показываем, способ индуцирования и записи хода замедленного типа, гиперчувствительность (DTH) реакции у крыс уха. Это сопровождается демонстрацией подготовки крысы ткани уха в течение двух-фотонной визуализации эффектор / память ответа Т-клеток.
Abstract
Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является иммунная реакция, в которой основными игроками являются CCR7 – эффектор / память Т-лимфоцитов. Здесь мы демонстрируем метод для стимулирования и записи хода DTH реакцию у крыс уха. Это сопровождается демонстрацией подготовки крысы ткани уха в течение двух-фотонной визуализации CCR7 – эффектор / память ответа Т-клеток.
Приемные DTH индуцирована при введении препарата в GFP-меченых Ova конкретных CCR7 – эффектор / память линии Т-клеток (Битон, С J. Визуализированные Эксперименты, выпуск 8). Затем клетки позволили, чтобы уравновесить у крыс в течение 48 часов до заражения путем введения одного уха физиологическим раствором (контроль уха), а другая с 1:01 смесь яиц и Ova сопряженных в Техас-красный (Ова-TR), чтобы позволить визуализации резидентов антиген-представляющих клеток.
Мы опишем метод подготовки ткани полезны для работы с изображениями подвижность клеток в глубокие слой кожи во время иммунного ответа, в сочетании с визуализацией коллагеновых волокон путем генерации второй гармоники. Ухо ткань разрезают на 5 х 5 мм квадраты (немного больше, тем лучше) и монтируются на пластиковые скользит покрова с использованием Vetbond ™, которые затем крепится с помощью силиконовой смазки в камеру изображения и superfused кислородом-пузырилась культуральной среде ткани при температуре 37 ° C .
Protocol
Индукция приемных DTH Пожалуйста, смотрите Юпитера статье: индукция и мониторинг приемных гиперчувствительности замедленного типа у крыс Кристина Битон, Джордж К. Chandy Кафедры физиологии и биофизики университета Калифорнии в Ирвине <…
Matheu, M. P., Beeton, C., Parker, I., Chandy, K. G., D. Cahalan, M. Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH. J. Vis. Exp. (18), e907, doi:10.3791/907 (2008).