Faire patch pipettes et électrodes Sharp avec un extracteur programmable

Summary

Cette vidéo montre comment utiliser un tire-programmables pour les pipettes de patch et électrodes pointu pour l'électrophysiologie. La même procédure peut être utilisée pour faire une variété d'outils de verre, y compris les aiguilles d'injection.

Abstract

Microélectrodes de verre (aussi appelé pipettes) ont été un cheval de bataille de l'électrophysiologie pendant des décennies. Aujourd'hui, ces pipettes sont fabriqués à partir de capillaires en verre à l'aide d'un tire-programmables. Ces instruments de la chaleur du capillaire en utilisant soit un filament métallique ou d'un laser et d'en tirer le verre en utilisant la gravité, un moteur ou les deux. Pipettes pour patch-clamp sont formées en utilisant la chaleur et ne la gravité, tandis que des électrodes pour l'enregistrement intracellulaire forte d'utiliser une combinaison de la chaleur, la pesanteur, et un moteur. La procédure utilisée pour faire des pipettes d'enregistrement intracellulaire est semblable à celui utilisé pour faire des aiguilles d'injection pour une variété d'applications, y compris l'injection dans des ovocytes de Xenopus ARNc. En général, capillaire en verre <1,2 mm de diamètre est utilisé pour faire des pipettes pour l'enregistrement de patch-clamp, tandis que plus étroit de verre est utilisé pour l'enregistrement intracellulaire (diamètre extérieur = 1,0 mm). Pour chaque outil, l'extracteur est programmé de façon légèrement différente. Cette vidéo montre comment faire les deux types de pipettes d'enregistrement en utilisant des programmes pré-établis extracteur.

Protocol

Pipettes de traction En utilisant une microélectrode extracteur comme le Sutter P-97 Flaming / Brown, tirer un ensemble d'environ 10-20 pipettes. Sélectionnez votre verre capillaire. Nous utilisons borosilicate capillaires (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm de diamètre extérieur, diamètre intérieur de 1.1mm, 10cm de long). Conservez le verre avec soin afin qu'il reste propre et sans poussière. Concevoir un programme de traction. Nous utilisons un programme en 5 ?…

Discussion

Le protocole est illustré ici, dans une utilisation quotidienne dans les laboratoires d'électrophysiologie et est également utilisé pour faire des aiguilles d'injection pour les cellules et les animaux. Avec un extracteur programmables, il est facile de faire des pipettes pour une variété d'utilisations. Avec une attention et des soins, le filament sur votre extracteur va durer un an ou plus. Bonne chance avec vos expériences.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Micropipette Puller	Instrument	Sutter Instruments	P-97	Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries	Reagent	Sutter Instruments	BF150-86-10	Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.