בידוד תרבות שלאחר הלידה cerebellar עכבר גרגיר Neuron ובתאים ונוירונים
Summary
כאן אנו מציגים שיטה לבודד cerebellar תרבות גרגר עצב ובתאים ונוירונים גרגיר cerebellar מהעכבר לאחר הלידה.
Abstract
קליפת המוח הקטן הוא מבנה תיאר היטב המספק הזדמנויות ייחודיות ללימוד המאפיינים עצב 1,2 פיתוח. סוגי נוירונים המוח הקטן (תאים גרגיר, תאים פורקינג' ו interneurons מעכבות), גרגיר נוירונים הם ללא ספק רבים ביותר הן הסוג הנפוץ ביותר של הנוירונים במוח היונקים. במכרסמים, הנוירונים גרגיר cerebellar נוצרות במהלך שני הראשונים שלאחר הלידה שבועות ובתאים בשכבה החיצונית של קליפת המוח הקטן, את השכבה החיצונית גרגיר (EGL). הפרוטוקול המובא כאן מתאר טכניקות להעשיר גרגיר נוירונים תרבות ובתאים שלהם המוח הקטן שלאחר הלידה העכבר. נתאר הליכים כדי להשיג תרבויות של טוהר הגדלת 3,4, אשר ניתן להשתמש בהם כדי ללמוד את הבידול של מתרבים ובתאים לתוך הנוירונים גרגיר 5,6. לאחר ובתאים להבדיל, התרבויות גם לספק אוכלוסייה הומוגנית של נוירונים גרגיר מניפולציה אפיון ניסיוני של תופעות כגון synaptogenesis, פונקציה קולטן הגלוטמט 7, אינטראקציה עם תאים אחרים cerebellar מטוהרים 8,9 או מוות של תאים 7.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה מבוסס על שינויים של נהלים אשר תוארו 3,7,11 האחרונות. ישנן מספר נקודות חשובות לציין כמפורט להלן.
הנוירונים גרגיר ו ובתאים לדבוק בתוך 2 שעות של ציפוי. בתאים בריאים יש מורפולוגיה עגול תחת 4 שלב הניגוד מיקרוסקופ. תוך 24 שעות לאחר ציפוי, תא…
Acknowledgements
אנו מודים ברברה קארלטי אנה מארי קני הצעות שלא יסולא בפז. HYL נתמך על ידי מענק הכשרה "הורמונים: לביוכימיה וביולוגיה מולקולרית", DK07328. נתמך בחלקו על ידי מענק 5R01-NIH NS16951 (רמ"א).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer with 70μm mesh pore | BD Biosciences | 352350 | ||
| Spinal Needle | BD | 405182 | 20G x 3-1/2 inches | |
| Poly-D-Lysine mol wt>300,000 | Sigma | P1024 | Each new batch of Poly-D-Lysine must be tested. | |
| Percoll | Sigma | P-1644 | ||
| Penicillin-Streptomycin (100X) | Sigma | P4333 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-103 | Must be calcium and magnesium free. | |
| Neurobasal A-Medium | Invitrogen | 10888-022 | ||
| Glutamax I supplement | Invitrogen | 35050-061 | ||
| B-27 Serum Free Supplement (50x) | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 12-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3029 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| 25-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3037 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| Papain Dissociation System | Worthington Biochemical Corporation | LK 003150 | Kit is good for five isolations. | |
| Permaset scissors | Roboz | RS6782 | ||
| Dumont #5 (Dumostar) | Roboz | RS4978 | ||
| 4-well culture dish | Nunc | 176740 | ||
| 6-well culture dish | Nunc | 140685 |
Riferimenti
- Altman, J., Bayer, S. A. . Development of the cerebellar system: in relation to its evolution, structure, and functions. , (1997).
- Hatten, M. E., Heintz, N. . Annual Review of Neuroscience. 18, 385-285 (1995).
- Hatten, M. E., Gao, W. -. Q., Morrison, M. E., Banker, G., Goslin, K. . in Culturing Nerve Cells. , 419-419 (1998).
- Hatten, M. E. . The Journal of Cell Biology. 100 (2), 384-384 (1985).
- Carletti, B., Rossi, F. . Neuroscientist. 14 (1), 91-91 (2008).
- Knoepfler, P. S., Kenney, A. M. . Cell Cycle. 5 (1), 47-47 (2006).
- Manzini, M. C., Joseph, D. J., MacDermott, A. B. . Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (2), 328-328 (2007).
- Manzini, M. C., Ward, M. S., Zhang, Q. . Journal of Neuroscience. 26 (22), 6040-6040 (2006).
- Baptista, C. A., Hatten, M. E., Blazeski, R. . Neuron. 12 (2), 243-243 (1994).
- Palay, S. L., Chan-Palay, V. . Cerebellar Cortex: Cytology and Organization. , (1974).
- Messer, A. . Brain Research. 130 (1), 1-1 (1977).
- Ruiz I Altaba, A. . Development. 126, 3205-3205 (1999).
- Wallace, V. A. . Current Biology. 9 (8), 445-445 (1999).
- Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. . Neuron. 22 (1), 103-103 (1999).
- Solecki, D. J., Liu, X. L., Tomoda, T. . Neuron. 31 (4), 557-557 (2001).
- Powell, S. K., Williams, C. C., Nomizu, M. . Journal of Neuroscience Research. 54 (2), 233-233 (1998).
- Lander, A. D., Fujii, D. K., Reichardt, L. F. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (7), 2183-2183 (1985).
- Kenney, A. M., Rowitch, D. H. . Molecular and Cellular Biology. 20 (23), 9055-9055 (2000).
- Kenney, A. M., Cole, M. D., Rowitch, D. H. . Development. 130 (1), 15-15 (2003).
- Pons, S., Trejo, J. L., Martinez-Morales, J. R. . Development. 128, 1481-1481 (2001).
