العزلة وثقافة ما بعد الولادة ماوس مخيخي الخلايا الحبيبية السلف الخلية العصبية والخلايا العصبية
Summary
هنا نقدم وسيلة لعزل الخلايا العصبية والثقافة الخلايا الحبيبية والخلايا العصبية للدماغ السلف الحبيبية للدماغ الفأر من بعد الولادة.
Abstract
قشرة المخيخ هو بنية صفها جيدا أن يوفر فرصا فريدة لدراسة خصائص الخلايا العصبية و1،2 التنمية. من أنواع الخلايا العصبية للدماغ (الخلايا الحبيبية ، وخلايا بركينيي interneurons المثبطة) ، حبيبة الخلايا العصبية هي الآن الأكثر عددا والأكثر وفرة في نوع من الخلايا العصبية في المخ لدى الثدييات. في القوارض ، يتم إنشاء الخلايا العصبية الحبيبية للدماغ أثناء الأسابيع الأولى بعد الولادة اثنين من الخلايا الاصلية في الطبقة الخارجية للقشرة المخيخ ، وطبقة خارجية الحبيبية (EGL). بروتوكول المعروضة هنا يصف التقنيات لإثراء ثقافة والخلايا العصبية والخلايا الحبيبية السلف الخاصة بهم من المخيخ الماوس ما بعد الولادة. سنقوم بشرح الإجراءات للحصول على ثقافات زيادة 3،4 نقاء ، والتي يمكن استخدامها لدراسة تمايز تكاثر الخلايا الاصلية الى خلايا عصبية 5،6 الحبيبية. مرة واحدة في الخلايا الاصلية تفرق ، وتوفر أيضا ثقافات السكان متجانسة من الخلايا العصبية الحبيبية للتلاعب التجريبية وتوصيف الظواهر مثل synaptogenesis ، الغلوتامات وظيفة مستقبلات 7 ، والتفاعل مع الخلايا الأخرى مخيخي المنقى 8،9 أو موت الخلية 7.
Protocol
Discussion
ويستند هذا البروتوكول على إدخال تعديلات على الإجراءات التي تم وصفها في 3،7،11 الماضية. هناك عدة نقاط هامة لاحظ كما هو مبين أدناه.
الخلايا العصبية والخلايا الحبيبية السلف الالتزام في حدود 2 ساعة من الطلاء. الخلايا السليمة لديها الجولة التشكل تحت الم…
Acknowledgements
نشكر باربرا Carletti وآنا ماري كيني للحصول على اقتراحات لا تقدر بثمن. معتمد من قبل HYL "الهرمونات : الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية" التدريب غرانت ، DK07328. بدعم جزئي من المعاهد الوطنية للصحة 5R01 NS16951 منحة (CAM).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer with 70μm mesh pore | BD Biosciences | 352350 | ||
| Spinal Needle | BD | 405182 | 20G x 3-1/2 inches | |
| Poly-D-Lysine mol wt>300,000 | Sigma | P1024 | Each new batch of Poly-D-Lysine must be tested. | |
| Percoll | Sigma | P-1644 | ||
| Penicillin-Streptomycin (100X) | Sigma | P4333 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-103 | Must be calcium and magnesium free. | |
| Neurobasal A-Medium | Invitrogen | 10888-022 | ||
| Glutamax I supplement | Invitrogen | 35050-061 | ||
| B-27 Serum Free Supplement (50x) | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 12-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3029 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| 25-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3037 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| Papain Dissociation System | Worthington Biochemical Corporation | LK 003150 | Kit is good for five isolations. | |
| Permaset scissors | Roboz | RS6782 | ||
| Dumont #5 (Dumostar) | Roboz | RS4978 | ||
| 4-well culture dish | Nunc | 176740 | ||
| 6-well culture dish | Nunc | 140685 |
Riferimenti
- Altman, J., Bayer, S. A. . Development of the cerebellar system: in relation to its evolution, structure, and functions. , (1997).
- Hatten, M. E., Heintz, N. . Annual Review of Neuroscience. 18, 385-285 (1995).
- Hatten, M. E., Gao, W. -. Q., Morrison, M. E., Banker, G., Goslin, K. . in Culturing Nerve Cells. , 419-419 (1998).
- Hatten, M. E. . The Journal of Cell Biology. 100 (2), 384-384 (1985).
- Carletti, B., Rossi, F. . Neuroscientist. 14 (1), 91-91 (2008).
- Knoepfler, P. S., Kenney, A. M. . Cell Cycle. 5 (1), 47-47 (2006).
- Manzini, M. C., Joseph, D. J., MacDermott, A. B. . Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (2), 328-328 (2007).
- Manzini, M. C., Ward, M. S., Zhang, Q. . Journal of Neuroscience. 26 (22), 6040-6040 (2006).
- Baptista, C. A., Hatten, M. E., Blazeski, R. . Neuron. 12 (2), 243-243 (1994).
- Palay, S. L., Chan-Palay, V. . Cerebellar Cortex: Cytology and Organization. , (1974).
- Messer, A. . Brain Research. 130 (1), 1-1 (1977).
- Ruiz I Altaba, A. . Development. 126, 3205-3205 (1999).
- Wallace, V. A. . Current Biology. 9 (8), 445-445 (1999).
- Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. . Neuron. 22 (1), 103-103 (1999).
- Solecki, D. J., Liu, X. L., Tomoda, T. . Neuron. 31 (4), 557-557 (2001).
- Powell, S. K., Williams, C. C., Nomizu, M. . Journal of Neuroscience Research. 54 (2), 233-233 (1998).
- Lander, A. D., Fujii, D. K., Reichardt, L. F. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (7), 2183-2183 (1985).
- Kenney, A. M., Rowitch, D. H. . Molecular and Cellular Biology. 20 (23), 9055-9055 (2000).
- Kenney, A. M., Cole, M. D., Rowitch, D. H. . Development. 130 (1), 15-15 (2003).
- Pons, S., Trejo, J. L., Martinez-Morales, J. R. . Development. 128, 1481-1481 (2001).
