Name: Murin Model Hindlimb İskemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: Öğrenin, farelerde tek taraflı arka bacak iskemisini femoral arter ligasyonu ile oluşturma ve lazer Doppler perfüzyon görüntüleme ile doğrulama yöntemini. Bu model periferik arter hastalığı ve anjiyogenez araştırmaları için güvenilir bir sistem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Hibe Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, Doktora ve teknik yardım için Stanford Küçük Hayvan Imaging Core teşekkür ederim. Yazarlar ayrıca veteriner ekipman desteği için teşekkür ederiz. AM Bickford, Inc. Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri araştırma hibeler (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743 1K12 HL087746), California University of California (15IT-0257 ve 1514RT-0169) Tütün İlgili Hastalık Araştırma Programı tarafından desteklenen ve Rejeneratif Tıp California Institute (RS1-00.183). NH bir burs Amerikan Kalp Derneği tarafından desteklenmektedir.

1. Tek taraflı Hindlimb İskemi indüksiyonu <ol><li> Bu işlem için gerekli cerrahi aletler şunlardır: ince sivri forseps, sivri forseps, yaylı makas, cerrahi makas, iğne tutucu ve retraktörü. Piyasada bulunan retraktörlere daha küçüktür, çünkü bir ataç kullanarak kendi retraktörü olun. Bu araçların bir otoklav veya sıcak bir boncuk sterilizatör cerrahi öncesi sterilize edin. Koter aracı ve steril ince sivri pamuklu de bu ameliyat için gerekli olacaktır. Bu araçlar, işlem sırasında gerekli ipuçlarını yeniden sterilize edilmesi tavsiye edilir. </li><li> Araçları hazır olduğunuzda, anestezi indüksiyon odasına 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen izofluran% 1-3 içeren fare yerleştirin. </li><li> Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. Izofluran için operatör maruziyeti azaltmak için, kapağı açmadan önce anestezi kutusundan temizlemek için tavsiye edilir. </li><li> Sonra öncesi işletim masaya yatar pozisyonda hayvan ve izofluran bir sürekli akış bağlayın. Bir elektrikli tıraş makinesi, saç hindlimb çıkarın. Iyice saç kaldırmak için saç dökücü krem ​​uygulayın. </li><li> Fare dökümlü ısıtılmış yüzey üzerinde ameliyat masasına supin pozisyonda yerleştirin ve izofluran bir sürekli akış bağlayın. Genişletir ve bir parça bant ile hindlimb güvenli. Hindlimb güvenli sonra, üç alternatif betadin ve alkol scrubs ile cilt silin. Cerrahi işlemin geri kalanı için, 10X veya 20X büyütme hindlimb bölgenin büyütülmüş bir görünüm elde etmek için bir diseksiyon mikroskobu kullanın. </li><li> İnce forseps ve cerrahi makas kullanarak, diz medial uyluk doğru yaklaşık 1 cm uzunluğunda, deride bir kesi yapmak. </li><li> Fosfat kullanarak tamponlu salin (PBS) uyluk kas çevreleyen cilt altı yağ dokusu uzak fırça hafif, ince sivri pamuklu nemlendirilmiş. </li><li> Sonra, enine koter insizyon ve derialtı yağ dokusu aracılığıyla incelemek için altta yatan femoral arterden ortaya çıkarmak için de geçerlidir. </li><li> Yara açmak ve bir retraktörü alt ekstremite vaskülatürü daha iyi bir görünüm elde etmek için kullanın. </li><li> Nörovasküler demet maruz membranöz femoral kılıf aracılığıyla nazik, ince forseps ve sivri uçlu ince bir pamuklu çubukla delmeyin kullanma. </li><li> Sonra, ince forseps ve pamuklu temiz bir kümesini kullanarak, incelemek ve kasık yakın proksimal yerde femoral ven ve sinir femoral arterden ayrı. Diseksiyonu sonra, femoral arter proksimal ucunun altında 7-0 ipek sütür bir iplikçik geçmektedir. Çift knot kullanarak proksimal femoral arterden tıkamaktadır. Ikinci kravat ve transeksiyon olacak bir müdahale segmentinde uzunluğu bırakmak için mümkün olduğunca yara proksimal olarak gemide kravat yerleştirin. </li><li> Femoral arter, distal yerde diz yakın femoral ven ayırın. Popliteal arter proksimal femoral arter distal ucu altında 7-0 dikiş teli geçirin. Çift knot kullanarak geminin tıkamaktadır. </li><li> Knot ilk seti sadece proksimal çift knot ikinci bir set ile distal femoral arterden tıkamaktadır. Bu ikinci dikişlerle işlem prosedürü sırasında arter sürükleyici için kullanılacaktır. </li><li> Benzer şekilde, sürükleyici amaçlar için, knot ilk seti sadece distal çift deniz mili ikinci bir set ile proksimal femoral arterden tıkamaktadır. </li><li> Ince uçlu bir pamuklu çubukla ve bir çift yaylı makas ile distal ve proksimal knot arasında femoral arter segment transect. Femoral ven duvarı delmek için dikkatli kullanın. </li><li> Retraktörü çıkarın ve 5-0 vicryl sütürler kullanarak kesi yakın. Bu dikişler kendi erimesi gibi, daha sonraki bir zamanda kaldırılması gerekmez. </li><li> Kesi kapatıldıktan sonra, kurtarma kafes dökümlü ısıtmalı bir ped üstünde hayvan ve uyanık kadar sürekli izlemek. </li><li> 1 saat süreyle hayvan kurtarıldı sonra, iskemi indüksiyon onaylamak için lazer Doppler kan perfüzyon adım ile devam edin. </li></ol> 2. Lazer Doppler Kan Perfüzyon <ol><li> Lazer Doppler perfüzyon adım başlamak için fare 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen izofluran% 1-3 içeren anestezi indüksiyon odasına koyun. </li><li> Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. Izofluran için operatör maruziyeti azaltmak için, kapağı açmadan önce anestezi kutusundan temizlemek için tavsiye edilir. </li><li> Izofluran sürekli akışına bağlı öncesi ameliyat masasında hayvan yerleştirin. Sonra gerekli saç dökücü krem ​​takip elektrikli tıraş makinesi kullanarak hindlimb saç kaldırmak. </li><li> Saç çıkardıktan sonra,izofluran sürekli akış altında 5 dakika süreyle 37 ° C ısıtılmış yüzey üzerindeki hayvan koyun. Euthermia sağlamak için sıcaklık değişiklikleri belirgin perfüzyon etkileyecek gibi, çekirdek sıcaklığının izleyin. </li><li> 5 dakika sonra, yeşil renkli bir bez gibi bir sürekli akış izofluran bağlı olmayan bir yansıtıcı yüzey, ışık emici yatar pozisyonda hayvan koyun. Arka ayaklarında uzatın. </li><li> Sonra, lazer Doppler görüntüleyici ve kazanım yazılım açmak ve yazılım başlatılamadı. Görünümü ve çözünürlük alanın boyutunu belirtin. Bu gelecek analizi kolaylaştırmak için hayvanlar arasında tutarlı bir görünüm ve piksel yoğunluğu alanında tutmak en iyisidir. </li><li> Yeni bir dosya açın. Görüntü verilerini elde başlamak için tuşuna basın. Genellikle, fare mesafe görüntüleyici otomatik olarak algılar, ancak istenirse, görüntüleyici hayvan uzaklığı belirtmek. Lazer görüş alanı sınırları ve daha sonra veri elde başlayacaktır. </li><li> Satın alma tamamlandıktan sonra, görüntü, bacaklarda kan perfüzyonunun düzeyinin göstergesi renkleri bir dizi göstermeye başlayacaktır. Renkler daha iyi hayvanlar arasındaki verileri karşılaştırmak için belirli bir perfüzyon aralığı ayarlanabilir. </li><li> Veri toplama işlemi tamamlandığında, dosyayı kaydedin. </li><li> Sonra hayvan kurtarma kafes ve hayvan uyanık kadar sürekli izlemek. </li><li> Verileri analiz etmek, herhangi bir arka plan gürültü çıkarmak için analiz yazılımı eşik ayarı kullanın. Bir eşik 0.2 genellikle makul bir değerdir. 2 ve her hindlimb alanı kapsayacak ilgi bölgelerde, ya da ROI&#39;ler, seçin. Çeşitli yerlerinden, bacaklarda ve hayvanlar arasındaki yatırım getirisi standartlaştırmak için kullanılabilir. Sonra yatırım getirisi ortalama perfüzyon ve değişkenlik belirler. Iskemik ekstremite ve kontrol bacak arasında perfüzyon farkı ve perfüzyon oranı daha sonra kolayca tespit edilebilir. </li><li> Bu prosedür, zaman içinde hindlimb perfüzyon değişiklikleri takip tekrar edilebilir. Istenilen bir zaman noktasında, hayvan doku fonksiyon ve perfüzyon görüntü verilerini karşılaştırma değerlendirilmesi için ötenazi olabilir. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar: Şekil 1 2 hindlimb damarsal anatomi gösterilmiştir. Femoral arterden eksplantasyonu sonra hindlimb bir temsilci diyagramı Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Hindlimb iskemi indüksiyon onaylamak için Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, lazer Doppler perfüzyon görüntü analizi, kontrol uzuv karşılaştırıldığında, iskemik ekstremite kan akışını dramatik bir azalma gösterir. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Şekil 1" width="600" height="406" /> Şekil 1 hindlimb damarsal anatomisi. Asteriskler hindlimb iskemi indüksiyonu için ligasyonu yerleri göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Resim 2" width="600" height="450" /> Şekil 2, femoral arter çıkarıldıktan sonra proksimal ve distal sitelerde femoral arter ligasyonu sonra hindlimb anatomisini gösteren Temsilcisi bir diyagram. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Şekil 3" width="600" height="256" /> Şekil 3. sol hindlimb (ok ile gösterilen) iskemi indüksiyon öncesi ve sonrası kan akışını gösteren Laser Doppler görüntüleri.

<ol><li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%22">The anatomy of the laboratory mouse</a>. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
</ol>

Planlama ve hindlimb iskemi modelleri yaparken göz önünde değişkenlik bazı kaynaklar vardır. İlk olarak, iskemi yan dalları ile ilgili ligasyonu konuma göre değişebilir. Bu nedenle, modelin tutarlılığı için, hayvanların aynı düzeyde arter ligasyonu geçmelidir. Başka bir kaynaktan, yaşlı hayvanların (8-10 aylık) çok daha hızlı ve daha tam iyileşme oranları olan genç hayvanlarda (6-8 hafta), iskemik kurtarma değişkenlik hayvanların yaşı ile ilgili olarak (yani hemodinamik tarafından değerlendirildi lazer Doppler perfüzyon) veya fonksiyonel (yani koşu bandı test) ölçer. Terapötik bir müdahale ile gruplar arasında büyük bir fark görülebilir, çünkü biri anjiyogenik ajan değerlendirmek olduğu çalışmalar için, eski hayvan kullanmak için tercih edilebilir. Tersine, bir bir anti-anjiogenik faktör değerlendirirken olduğu çalışmalar için, en üst düzeye çıkarmak için etki büyüklüğü 3 genç hayvanlar tercih olabilir. Doğru şekilde gerçekleştirilmemesi durumunda, kanama, enfeksiyon, ya da ölüm gibi minimal komplikasyon olması gerekir. Eğer kanama femoral ven veya diğer gemiler, steril bir pamuk ile orta basınç yanlışlıkla kesintiye uğraması ile oluşur uçlu bir aplikatör veya gazlı bez kanama site kanama durana kadar uygulanmalıdır. Enfeksiyon belirtileri gösteren hayvanlar, anti-enfektif ajanlar ile tedavi edilmelidir. Önemli kangren sergileyen Hayvanlar beeuthanized gerekebilir. Bu komplikasyon, yaşlı hayvanlarda daha sık görülür ve BALB c farelerde 4 olarak bazı suşları, . Buna ek olarak, hindlimb iskemi modeli, orta derecede ağrısı hafif neden olabilir. Bu nedenle, buprenorfin veya carprofen gibi analjezikler ağrı tedavisi için gerekli IACUC tavsiyelere göre, idare edilmelidir. Sonuç olarak, biz hindlimb iskemi bir fare modeli PAD eğitimi için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem ortaya koymuştur. Hindlimb iskemi modeli lazer Doppler görüntüleme analizi ile vasküler patolojilerin incelenmesi ve tedavi adayları değerlendirmek için mükemmel bir sistem.

<table><tbody><tr><td>Cerrahi Aletler</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Constix Pamuklu Çubuklar</td><td>Alet</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (Povidon-iyot)</td><td>Reaktif</td><td>PDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%70 alkol</td><td>Reaktif</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 ipek sütür</td><td>Alet</td><td>Genzyme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 vicryl sütür</td><td>Alet</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Alet</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koter</td><td>Alet</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laser Doppler ve PeriScan PIM 3 Sistemi</td><td>Ekipman</td><td>Perimed</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murin model hindlimb İskemi

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde yaklaşık 10 milyon bireylerin, periferik arter hastalığı (PAH) etkiler, hem de dünya çapında yaygın. Tıbbi tedaviler semptomatik rahatlama için sınırlıdır. Cerrahi ya da endovasküler girişimlerin bazı kişiler için faydalı, ancak uzun vadeli sonuçlar genellikle hayal kırıklığı. Sonuç olarak, PAD tedavisinde yeni tedaviler geliştirmek için bir ihtiyaç var. Fare hindlimb iskemi hazırlık PAD bir model ve yeni tedavilerin test etmek için yararlıdır. Doku iskemisi, koroner veya serebral arter ligasyonu gibi diğer modeller ile kıyaslandığında, femoral arter ligasyonu, basit bir model için iskemik doku sağlar. Bu modelin diğer avantajları femoral arter ve düşük ölüm oranı erişim kolaylığı. Bu video, tek taraflı hindimb iskemi fare modeli için metodoloji ortaya koymaktadır. Ekstremite perfüzyon lazer Doppler görüntüleme yöntemi ile değerlendirilmesi de dahil olmak üzere, model oluşturma ve değerlendirilmesi için özel malzemeler ve usulleri açıklanacaktır. Bu protokol aynı zamanda Huang ve ark tarafından gösterilmiştir hücreleri, 1 nakli ve non-invazif izleme için kullanılabilir .

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Amerika Birleşik Devletleri'nde periferik arter hastalığı (PAH) yaklaşık 10 milyon kişiyi etkilemektedir ve dünya genelinde de yaygındır. ... için tıbbi tedaviler

Amerika Birleşik Devletleri'nde periferik arter hastalığı (PAH), özellikle sigara içenleri, diyabet hastalarını ve 70 yaş üstü kişileri olmak üzere yaklaşık 10 milyon bireyi etkilemektedir. Bu cerrahinin genel amacı, femoral arterin proksimal ve distal segmentlerini bağlayarak arka ekstremite iskemisi oluşturmaktır. Prosedür, farenin anestezi uygulanması, tıraş edilmesi ve cerrahi masaya sırt üstü pozisyonda yerleştirilmesiyle başlar.Ardından, dizden medial uyluğa doğru bir cilt insizyonu yapılarak alttaki femoral arter açığa çıkarılır. Daha sonra, femoral arter dikkatle femoral venden ayrılır. Distal ligasyon bölgesinin yanı sıra proksimal ligasyon bölgesinde de çift düğümler atılır.Ardından femoral arter segmenti eksize edilir. Kesi bölgesi sütürlerle kapatılır ve hayvanın anesteziden ayılmasına izin verilir. Arka ekstremite iskemisinin indüksiyonunu doğrulamak için, anestezi altındaki fare sırtüstü pozisyona getirilir.Ardından her iki arka ekstremite de lazer doppler ile taranır. Görüntü daha sonra kaydedilir ve perfüzyon açısından değerlendirilir. Merhaba, ben John Cook.Stanford Üniversitesi'ndeki kardiyovasküler tıp bölümünde tıp profesörüyüm. Laboratuvarımız anjiyogenez ve vasküler rejenerasyon konularıyla ilgilenmektedir. Bu videoda, doktora sonrası araştırmacılarım Dr. Nan Wong ve Hir Niyama, periferik arter hastalığı için önemli bir model olan ve laboratuvarımızda büyüme faktörlerinin ve hücre terapisinin anjiyogenez üzerindeki etkilerini değerlendirmek için sıklıkla kullanılan fare arka ekstremite iskemisi hazırlığını size tanıtacaklar.Vasküler onarım için kök hücre kaynaklı endotel hücrelerin etkisini incelemek amacıyla laboratuvarımızda bu prosedürleri kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Bu operasyon için gereken cerrahi aletler arasında ince uçlu penset, uçlu penset, yaylı makas, cerrahi makas, iğne tutucu ve ekartör yer almaktadır.Ticari olarak mevcut olanlar daha büyük olduğu için, bir ataş kullanarak kendi ekartörümüzü yapıyoruz. Cerrahi işlem öncesinde bu araçlar sıcak boncuk sterilizatör ile sterilize edilir; ayrıca bu ameliyat için bir koter cihazına ve steril ince uçlu pamuklu çubuklara ihtiyaç duyulacaktır. Araçlar hazır olduğunda, fareyi dakikada bir litre akış hızındaki %100 oksijen içinde %1 ila 3 izofloran içeren anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.Fareyi, dış uyaranlara tepki vermeyene kadar indüksiyon odasında bırakın. Ardından hayvanı indüksiyon odasından çıkarın. Daha sonra hayvanı ameliyat masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve sürekli isofluran akışına bağlayın.Elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak arka bacağındaki tüyleri temizleyin. Tüyleri tamamen temizlemek için tüy dökücü krem uygulayın. Fareyi tıraş ettikten sonra, arka bacağı uzatın ve bir parça bantla sabitleyin.Arka ekstremite sabitlendikten sonra, cildi sırayla üç kez Betadine ve alkol ile silerek temizleyin. İnce forseps ve cerrahi makas kullanarak, fosfat tamponlu salin (PBS) ile nemlendirilmiş ve uçları sivri pamuklu çubuklar yardımıyla, dizden medial uyluğa doğru yaklaşık bir santimetre uzunluğunda bir cilt insizyonu yapın.Uyluk kasını çevreleyen deri altı yağ dokusunu nazikçe fırçalayarak temizleyin. Ardından, koterle enine kesiler atarak deri altı yağ dokusunu disseke edin ve alttaki femoral arteri açığa çıkarın. Sonrasında, yarayı açmak ve alt ekstremite damar yapısını daha iyi görebilmek için bir ekartör kullanın.İnce uçlu bir pamuklu çubuk ve ince pens kullanarak, nörovasküler demeti açığa çıkarmak için membranöz femoral kılıf nazikçe delinir. Ardından, temiz bir ince pens ve pamuklu çubuk seti kullanılarak, kasık yakınındaki proksimal konumda femoral arter, femoral ven ve sinirden diseke edilerek ayrılır. Diseksiyonun ardından, femoral arterin proksimal ucunun altından bir adet 7-0 ipek sütür geçirilir.Proksimal femoral arteri çift düğüm kullanarak tıkayın. İkinci bağ için yeterli uzunluk bırakmak ve arasından kesilecek bir segment sağlamak amacıyla, bağı damarın yara içerisinde mümkün olduğunca proksimaline yerleştirin. Femoral arteri, dize yakın distal konumdan femoral venle ayırın.Popliteal arterin proksimalinde bulunan femoral arterin distal ucunun altından yedi sıfır sütur geçirin. Çift düğümler kullanarak damarı tıkayın. İlk düğüm setinin hemen proksimalinden ikinci bir çift düğüm seti ile distal femoral arteri tıkayın.Bu ikinci dikiş seti, transeksiyon prosedürü sırasında arteri tutmak için kullanılacaktır. Benzer şekilde, tutma amacıyla, proksimal femoral arteri, ilk düğüm setinin hemen distalinden ikinci çift düğüm seti ile tıkayın. Distal ve proksimal düğümler arasındaki femoral arter segmentini, ince uçlu bir pamuklu çubuk ve bir yaylı makas yardımıyla kesin.Femoral ven duvarını delmemeye dikkat edin. Retraktörü çıkarın ve insizyonu 5-0 quil sütürlerle kapatın. İnsizyon kapatıldıktan sonra hayvanı iyileşme kafesine geri götürün ve uyanana kadar izleyin. Hayvan bir saat boyunca iyileştikten sonra lazer doppler kan perfüzyonuna geçin.İskemi indüksiyonunu doğrulamak için izlenecek adımlar. Lazer doppler perfüzyon aşamasına başlamak için fareyi, %100 oksijen akış hızının dakikada bir litre olduğu ve %1 ila %3 izofluran içeren anestezi indüksiyon kamarasına yerleştirin. Fare, dış uyaranlara yanıt vermeyene kadar indüksiyon kamarasında bekletin.Ardından hayvanı indüksiyon haznesinden çıkarın ve sürekli isoflorin akışına bağlı olan ameliyat öncesi masasına yerleştirin. Daha sonra, elektrikli tıraş makinesi kullanarak arka ekstremitedeki tüyleri temizleyin ve gerekirse tüy dökücü krem uygulayın. Tüyleri temizledikten sonra, hayvanı sürekli isoflorin akışı altında beş dakika boyunca 37 °C ısıtılmış bir yüzeye yerleştirin.Beş dakika sonra, hayvanı izofloran sürekli akışına bağlı yeşil renkli kumaş gibi yansıtıcı olmayan, ışığı emen bir yüzeye sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Arka ekstremiteleri uzatın. Ardından, lazer doppler görüntüleyiciyi ve veri toplama yazılımını açarak yazılımı başlatın.Görüş alanı boyutunu ve çözünürlüğü belirleyin. Görüş alanını ve piksel yoğunluğunu hayvanlar arasında tutarlı tutmak en iyisidir. Gelecekteki analizleri kolaylaştırmak için yeni bir dosya açın.Görüntü verilerini almaya başlamak için başlat düğmesine basın. İstendiğinde, hayvanın görüntüleyiciye olan uzaklığını belirtin. Lazer, görüş alanı sınırlarını gösterecek ve ardından veri toplamaya başlayacaktır.Görüntüleme tamamlandıktan sonra, bacaklara giden kan profüzyon seviyesini gösteren bir renk yelpazesi görünmeye başlayacaktır. Renkler belirli bir profüzyon aralığına göre ayarlanabilir. Veri toplama işlemi bittiğinde hayvanlar arasındaki verileri daha iyi karşılaştırabilmek için dosyayı kaydedin, ardından hayvanı derlenme kafesine geri götürün ve uyanana kadar hayvanı sürekli olarak izleyin.Verileri analiz etmek için, arka plan gürültüsünü çıkarmak amacıyla analiz yazılımındaki eşik ayarını kullanın. 0.2'lik bir eşik değeri genellikle makul bir değerdir. Her bir arka bacak bölgesini kapsayan iki ilgi alanı veya ROI seçin.Uzuvlar ve hayvanlar arasında ROI'yi standardize etmek için çeşitli işaret noktaları kullanılabilir ve ardından ROI içindeki ortalama perfüzyon ile değişkenlik belirlenebilir. Böylece, iskemik uzuv ile kontrol uzvu arasındaki perfüzyon farkı ve perfüzyon oranı kolayca tespit edilebilir. Arka uzuv perfüzyonundaki değişiklikleri takip etmek için bu prosedür tekrarlanabilir.Zaman içinde istenen bir zaman noktasında, doku fonksiyonunun değerlendirilmesi için hayvan ötanize edilebilir. Perfüzyon görüntüleme verileriyle karşılaştırmalı olarak, femoral arter bağlanması sonrası arka uzuvun temsili bir şeması burada gösterilmiştir. Süturlar, proksimal ve distal ligasyon bölgelerinin konumlarını işaretlemektedir.Cerrahi işlem dikkatle gerçekleştirildiğinde kanama minimum düzeyde olur ve ameliyat bir saatten kısa sürede tamamlanabilir. İşte lazer doppler perfüzyon görüntü analizi sonuçları. Soldaki görüntü, iskemik indüksiyon öncesinde her iki ekstremitenin perfüzyonunu göstermektedir.Sağdaki görüntü her iki ekstremitenin de perfüzyonunu göstermektedir. Sol arka ekstremite iskemik indüksiyona maruz bırakılmıştır. Görüntüdeki renk yoğunluğu, kan akış miktarını belirtmektedir.Kontrol ekstremite ile karşılaştırıldığında, iskemik ekstremite çok az renk göstermektedir; bu durum, kan akışında ciddi bir azalma olduğunu göstermektedir. Yazılım bu verileri kullanarak, perfüzyon farkını ve perfüzyon oranını belirlemek amacıyla iskemik ve kontrol ekstremitelerdeki ortalama perfüzyonu nicelleştirebilir. Dolayısıyla, bu sonuçlar arka ekstremitede iskeminin indüklendiğini doğrulamaktadır.Fare modelinde tek taraflı arka ekstremite iskemisinin nasıl indükleceğini ve iskemi indüksiyonunun lazer Doppler kan profüzyonu ile nasıl doğrulanacağını size gösterdik. Lazer Doppler görüntüleme analizi ile desteklenen arka ekstremite iskemi modeli, vasküler patolojileri incelemek ve terapötik adayları değerlendirmek için mükemmel bir sistemdir. Bu prosedürü, Huang ve ark. tarafından bir başka JoVE videosunda gösterilen hücre transplantasyonu ve invaziv olmayan hücre takibi işlemleri izleyebilir.Bu prosedürler uygulanırken, femoral arteri sprain makasla çıkarırken femoral ven duvarını delmemeye dikkat etmek önemlidir. Ayrıca, yüksek iskemi modelinin tutarlılığını sağlamak için deneydeki tüm hayvanlarda benzer ligasyon bölgeleri kullanın. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz bir adım-adım prosedürü ve gerekli enstrümantasyon açıklaması dahil murin spinotrapezius kas bir roman arter ligasyonu modeli göstermektedir. Biz cerrahi ve intravital ve konfokal mikroskopi kullanılarak vasküler ağ şekillenmesi ve fonksiyonel vazodilatasyon ile ilgili, sonuç ölçümleri açıklayacağız.

Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

Spinal kord iskemi-reperfüzyon hasarı mekanistik anlayış eksikliği, yüksek riskli aort operasyonları aşağıdaki paraplejiyi önlemek için ek maddeler engellemiştir. Bu nedenle, hayvan modellerinin geliştirilmesi zorunludur. Bu el yazması bir fare modelinde torakal aort tıkanıklığı sonrası tekrarlanabilir alt ekstremite felci gösterir.

Spinal Kord İskemi-reperfüzyon bir Mürin Modelinde Torasik Aort Tıkanıklığı tarafından tekrarlanabilir Parapleji

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Kemirgenlerde intestinal iskemi-reperfüzyon hasarının (IRI) yaygın olarak kullanılan bir cerrahi modelinin nasıl oluşturulacağını açıklıyoruz. Prosedür, superior mezenterik arterin tıkanmasını ve ardından kan akışının restorasyonunu içerir. Bu model, hem veterinerlik hem de insan tıbbında bağırsak IRI'sinin tıkayıcı nedenlerini araştıran çalışmalar için yararlıdır.

Superior mezenterik arterin tıkanması yoluyla intestinal iskemi-reperfüzyon hasarının kemirgen modeli

Öğrenin, farelerde tek taraflı arka bacak iskemisini femoral arter ligasyonu ile oluşturma ve lazer Doppler perfüzyon görüntüleme ile doğrulama yöntemini. Bu model periferik arter hastalığı ve anjiyogenez araştırmaları için güvenilir bir sistem sunar.

Murin Model Hindlimb İskemi

Daha fazla video keşfet