マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でMammospheresを形成し、

こんにちは、ユニフォームサービス大学健康科学部病理学科のメアリー・ルー・カトラー博士の研究室のベサニー・モリソンです。本日は、HC 11マウス乳腺上皮細胞からマンモス球を作製する手順をご紹介します。私たちの研究室では、この手順を使用してラクトの分化を研究しています。

それでは、このプロトコルを開始するために始めましょう。HC 11細胞をRPMI 1640培地で6日間増殖させ、10%ウシのウシ血清5マイクログラム/ミリリットルのインスリン、10マイクロモルのハイス、および10ナノグラム/ミリリットルを添加します。能力を確立するための上皮成長因子EGF。

これらの細胞は、Nancy Hines と Bernard Groner の研究室で、組織培養フードの遺伝子分化の制御を研究するために広く使用されています。その後、細胞をPBSで洗浄し、EGFを含まない増殖培地で24時間維持します。このインキュベーション後、インキュベーション後にラクト分化を誘導するために、デキサメタゾン、インスリン、プロラクチンを添加したRPMIからなる分化培地で細胞をインキュベー

鑑別媒体では、デジタルカメラを搭載したオリンパスIX71顕微鏡を使用して、マモ球を撮影し、列挙します。位相差顕微鏡法により、マモ球体は誘導後120時間を通じて複数回撮影および列挙されます。この画像は、通常のメモリの低電力倍率を示しています。

上皮細胞単層細胞は、遺伝子ホルモンによる刺激の約3日間、コンフルエンスに維持されなければなりません。これは、誘導の3日後に形成された新しいマンモスフィアを低倍率で見ています。それらは、上皮細胞全体にランダムに間隔を空けた小さなドームのような構造として現れ始めます。

再び低電力で。ここでは、誘導後5日で発達した複数のマンモ球体を見てみましょう。ここでは、高倍率で大きさ・数ともにマモス球が大きくなり続けており、マモス球の特徴である泡やドーム状がはっきりと見て取れます。

上皮細胞を誘導して、遺伝子分化のマーカーとして使用されるマンモスフィアを形成する方法を紹介しました。この手順を行うときは、誘導前にコンフルエンスの細胞を維持することを覚えておくことが重要です。なぜなら、この間、細胞は遺伝子ホルモンに完全に自信を持って応答するために相互作用する必要があるマトリックスタンパク質を生成するためです。また、EGFは分化プロセスを阻害するため、処理前に培地からEGFを除去することを忘れないことも重要です。

というわけで、これだけです。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。