Protocollo sulla durata della vita per Drosophila melanogaster: generazione di curve di sopravvivenza per identificare le differenze nella longevità della mosca

- Inizia ospitando un determinato numero di moscerini della frutta maschi e femmine di Drosophila melanogaster in una fiala contenente terreno di farina di mais. Ciò consente una densità costante di prole.

Lascia che le mosche femmine depongano le uova. Quindi rimuovere le mosche adulte. Le uova diventeranno larve, pupe e infine mosche adulte nell'arco di 10 giorni. Le nuove mosche che emergono prima della loro coorte dovrebbero essere rimosse prima del giorno 9. Dividere le mosche ora sincronizzate in gruppi per il controllo e le condizioni sperimentali. Il cohousing di mosche maschio e femmina consente l'accoppiamento, eliminando una variabile che influisce sulla durata della vita.

Dopo diversi giorni, separa le mosche in gruppi in base al sesso. Posizionare un numero uguale di mosche nella condizione sperimentale corrispondente. Ogni tre giorni, trasferisci le mosche vive in una nuova fiala e registra il numero di mosche morte. Ripeti questo processo fino a quando tutte le mosche sono morte.

Dopo almeno tre esperimenti replicati, tracciare la percentuale media di mosche sopravvissute al giorno per generare curve di sopravvivenza media per ciascuna condizione. In questo esempio, vedremo come generare curve di sopravvivenza per coorti trattate con sostanze chimiche che alterano il sistema endocrino.

- Nel protocollo di durata della vita, per prima cosa preparare 20 fiale con otto femmine e quattro maschi, ciascuna riempita con 10 millilitri di cibo a base di farina di mais, e alloggiarle a 25 gradi Celsius. Dopo quattro giorni, scartare le mosche e rimettere le fiale nell'incubatrice. Nel tardo pomeriggio del giorno 9, rimuovere tutte le mosche appena emerse dalle fiale e rimettere le fiale nell'incubatrice.

Dopo 16-24 ore, dividere a 250 mosche adulte di un giorno di entrambi i sessi in quattro gruppi sotto leggera anestesia con anidride carbonica e trasferirle in flaconi da 250 millilitri contenenti alimenti per adulti, tre integrati con diverse concentrazioni di EDC e uno con il solo solvente EE2. Mantieni le mosche a 25 gradi Celsius per due o tre giorni per consentire loro di accoppiarsi. Quindi ordina ogni coorte di mosche in base al sesso in due gruppi. All'interno di ciascuna condizione di trattamento per entrambi i sessi, suddividere casualmente ciascun gruppo in cinque fiale parallele con una densità di 20 individui per fiala. Prepara un foglio di calcolo della durata della vita in cui il numero di mosche morte viene sottratto dal numero di mosche sopravvissute al trasferimento precedente in modo da ottenere automaticamente il numero di sopravvissuti ad ogni trasferimento.

Dopo tre giorni, trasferire contemporaneamente le mosche senza anestesia in nuove fiale contenenti il cibo corrispondente e controllare la morte. Registra l'età delle mosche e il numero di mosche morte. Ripeti il trasferimento ogni tre giorni fino a quando tutte le mosche muoiono.