Подготовка сердца дрозофилы: Техника для изучения физиологии сердца во взрослой мухе

- Отличается от позвоночных, сердце Дрозофилы является частью открытой кровеносной системы. Сердце взрослой мухи - это трубчатая структура, построенная из кардиомиоцитов, которая соединена с эпидермисом мышцами элария и встроена во внеклеточную матрицу. Сердечная камера находится на задней части мухи и перекачивает гемолимпу в аорту, из которой она течет в открытую полость тела.

У насекомых гемолитф служит как кровью, так и интерстициальной жидкостью, несущей питательные вещества, сигнальные молекулы и иммунные клетки. Дополнительные ориентиры сердца включают остию, которые являются отверстиями вдоль трубки, и интракардиальные клапаны. Перикардиальные клетки локализованы вдоль сердечной трубки и являются частью выделительной системы мухи.

В экспериментальной подготовке сердца, искусственная гемолимфа имитирует физиологические условия для сохранения функции тканей. Хотя природный гемолимфа не отвечает за газообмен, искусственная гемолимфа должна быть хорошо насыщена кислородом, чтобы заменить отсутствие функциональной трахеи системы. В следующем эксперименте мы демонстрируем полутронутую подготовку сердца от взрослой мухи для живой визуализации или электрофизиологии.

- Перед началом работы мы сначала готовим искусственный гемолимфой раствор. Это решение содержит сахарозу и трегалозу, которые следует добавить в искусственную гемолимфу из холодильных растворов запаса непосредственно перед использованием для предотвращения бактериального загрязнения. Принесите искусственную гемолимфу к комнатной температуре и оксигенировать раствор пузырьками воздуха в течение по крайней мере 15 минут.

Далее, потяните несколько тонких капилляров с помощью стандартного пипетки шкив, который будет необходим для удаления жировых тел в лету.

После того, как все было подготовлено, взрослые мухи должны быть обезболены. Это может быть сделано с помощью краткого воздействия летать сон в течение двух-пяти минут, но будьте осторожны, чтобы не оставить мух в лету сон дольше, чем пять минут. Краткосрочное воздействие холода также может быть использован для анестезии мух, но углекислый газ не рекомендуется, поскольку он имеет более длительное воздействие на пульс и ритмичность.

Далее, анестезированные мухи помещаются, спинной стороной вниз, в чашку Петри, покрытую тонким слоем вазелина. Гидрофобная кутикула в крыльях и теле должна обратимо прилипать к желе, но муха может быть перемещена при необходимости.

Голова, брюшной нервный шнур и ноги удаляются одним разрезом. После разреза препарат погружается в кислородный искусственный гемолимфовый раствор. С помощью пружинных ножниц задняя кончик живота, состоящая из брюшного сегмента 7 и 8, удаляется одним разрезом.

Вставьте лезвия ножниц в небольшое отверстие в кончике живота и разрежьте кутикулу боковой. Это освобождает один край брюшной кутикулы. Возьмите лоскут с типсами и сделайте аналогичный разрез вдоль противоположного бокового края живота.

Кишечник и другие органы брюшной полости, как правило, могут быть удалены в качестве одной массы с помощью ювелиров миппы и нежный дергая. Удаление внутренних органов показывает бьющееся сердце трубки, которая по-прежнему прилагается к спинной кутикулы небольшими мышцами элария и окружен жиром органов. Вытащил капилляры вставляются в пластик, 1/16-дюймовый трубки прилагается к вакууму источника.

После настройки, эта система всасывания используется, чтобы сосать лишний жир со всего сердца трубки. Он также может быть использован для удаления пузырьков воздуха, которые накапливаются вокруг кутикулы и любого мусора. Extreme уход должен быть принят, чтобы избежать прикосновения к сердцу себя, и потому, что задняя часть сердца очень хрупкая, что регион следует избегать в целом.

При необходимости кутикулу и прикрепленное сердце можно изменить, аккуратно подняв кутикулу из вазелина и тщательно укрощение ее обратно вниз, снова избегая любого контакта с сердечной тканью. На данный момент раствор купания препарат следует заменить свежей, искусственной гемолимфой. Этот препарат должен быть допущен к эквилибрации в течение 20-30 минут с оксигенацией до любых манипуляций. Если препарат должен поддерживаться дольше 60 минут, его следует повторно перелить со свежей искусственной гемолимфой. также использоваться для электрофизиологической записи или для гистологических манипуляций.