Dissociazione meccanica: un metodo per ottenere cellule vitali da un tessuto

Per prima cosa, pesa un frammento di tessuto e misurane la lunghezza, la larghezza e l'altezza. Metti il fazzoletto in un piatto di coltura con un terreno di coltura e taglialo a pezzetti usando un bisturi. Trasferire il tutto in una provetta a C per l'omogeneizzazione utilizzando una pipetta Pasteur.

Posizionare il tubo in un dissociatore meccanico ed eseguire i cicli secondo necessità. L'apparato utilizza forze meccaniche per estrarre singole cellule vitali dal campione di tessuto mantenendo l'integrità cellulare, comprese le proteine di superficie. Decantare l'omogeneizzato attraverso un colino cellulare fissato su una provetta da centrifuga.

Riomogeneizzare il tessuto rimanente e filtrare l'omogenato attraverso il filtro cellulare nella provetta. Centrifugare l'omogeneizzato e rimuovere il surnatante. A questo punto, risospendere il pellet cellulare nel terreno di coltura e trasferire una piccola quantità di sospensione cellulare in una provetta contenente la colorazione blu di tripano.

Dopo la colorazione, trasferire le cellule su un vetrino per emocitometro. Contare le celle vitali trasparenti. Le cellule morte assorbono la colorazione, poiché la loro membrana cellulare non è