Effetto dell'anticorpo anti C-fms sull'osteoclastogenesi nelle cellule del midollo osseo di topo in vitro

L'osteoclastogenesi è il processo mediante il quale i precursori degli osteoclasti si differenziano e si fondono per formare osteoclasti multinucleati.

Per studiare l'effetto dell'anticorpo anti-c-fms sull'osteoclastogenesi in vitro, prelevare una piastra di coltura contenente una sospensione di cellule di midollo osseo di topo. Aggiungere il fattore stimolante le colonie di macrofagi, M-CSF.

In coltura, M-CSF si lega al suo recettore specifico, c-fms, sulle cellule precursori mieloidi, attivando le vie di segnalazione e causando il differenziamento in macrofagi del midollo osseo, i BMM, che rappresentano i precursori degli osteoclasti e aderiscono alla piastra.

Rimuovere le celle non aderenti. Raccogli i BMM e seminali su pozzetti a piastre multipozzetto. Integrare con M-CSF e attivatore del recettore del ligando del fattore nucleare kappa-Β, RANKL.

Aggiungere concentrazioni crescenti di anticorpi anti-c-fms ai pozzetti.

Nel pozzetto di controllo, M-CSF si lega ai recettori c-fms e attiva le vie di segnalazione, stimolando l'espressione del recettore RANK e promuovendo la sopravvivenza e la proliferazione del BMM. RANKL si lega ai recettori RANK, innescando una cascata di segnalaz