Name: 동적 클램프 기법을 사용 랫 Midbrain Dopaminergic 뉴런에서 NMDA 수용체의 전도의 응용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-21T15:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: 학습하세요 랫 중뇌 도파민성 뉴런에서 동적 클램프 기법을 이용한 NMDA 수용체 전도 적용 방법을. 이 기술은 신경 활동을 정밀하게 제어하여 생체 뉴런의 수용체 활성화 효과를 연구하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 MH084494 (CJL), 그리고 MH079276 및 NS060658 (CAP)에 의해 지원되었다.

1. 슬라이스 준비 <ol><li> 진동 마이크로톰를 사용하여 뇌의 슬라이스 컷. 우리는 산 안토니오 기관 애니멀 케어 및 사용위원회 텍사스 대학에 따라 진동 마이크로톰 (Microm HM 650V)를 사용하여 isoflurane - anethetized 스프 라그 - 돌리 쥐 (찰스 리버 연구소)에서 240 μm의에게 수평 midbrain의 조각을 준비했습니다. </li><li> 당신이 기록 준비가 될 때까지 배양 챔버의 조각 유지. (aCSF, MM)을 우리는 32 ° C로 가열하고 인공 뇌척수 가득 부화 컨테이너를 사용하여 : 126 NaCl, 2.5 KCl, 1.25 아니 2 PO 4, 4 MgCl 2, 2 CaCl 2, 10 덱스 트로 오스, 25 NaHCO 3, 1.3 아스코르비 산, 2.4 나트륨 pyruvate와 0.05 글루타티온. </li></ol> 2. Electrophysiological 녹음 <ol><li> 35 인공 뇌척수 (aCSF)가 ° C가 perfused되고있는 세포 녹음 장비에 대한 슬라이스를 전송합니다. 우리는 2mM MgCl 2가 사용되었고 글루타티온가 생략되었습니다 제외 1.2와 같은 aCSF을 사용합니다. 수평으로 준비 조각을 위해, 우리는 일반적으로 정중선을 따라 조각을 이등분. </li><li> 대상 신경 세포를 시각화. 우리는 기울기 콘트라스트 이미징 시스템과 개별 substantia 니그라 dopaminergic의 뉴런을 시각. </li><li> 전자 전극 풀러를 사용하여 전극을 당기세요. 우리는 MΩ P97 Micropipette 풀러 (서터 악기 회사)를 사용 40-10의 팁 저항과 전극을 가져옵니다. </li><li> 원하는 내부 솔루션 전극을 입력합니다. 138 K - 글루 콘 산, 10 HEPES, 2 MgCl 2, 0.2 EGTA, 0.0001 CaCl 2, 4 나 - ATP, 0.4 나 - GTP : 우리는이 포함된 솔루션을 (MM)을 사용합니다. 내부 솔루션은 1M 코와 270-275 mOsms의 osmolarity를​​ 사용하여 7.3의 산도 조정되었습니다. </li><li> 원하는 신경 세포에 gigaohm 인감을 확인합니다. 파열 흡입과 인감. 이것은 전체 휴대폰 녹음을 구성합니다. Multiclamp 700B 앰프는 우리의 구성에 사용되었습니다. 증폭기는 다음의 '= 0'현재 클램프 모드에 배치되어야합니다. </li></ol> 3. 다이나믹 클램프와 전도성 신청 <ol><li> RTXI (www.rtxi.org)은 동적 클램프 컴퓨터에서 실행되었습니다. NMDA 수용체를 포함하는 사용자 정의로 작성된 모델은 메모리에로드되었습니다. 실시간으로 세포에 주입되는 전류는 다음 공식에 의해 계산됩니다 : I NMDA = - g NMDA * [1 / (1 ​​+ ([MG] / 3.57) * E (- V m * 0.062))] * (V m - E NMDA) 여기서 g NMDA 원하는 전도성 (NS입니다; 기본적으로) 0 NS로 설정 [MG]는, E NMDA는 NMDA 수용체 (0 MV으로 설정)에 대한 반전 가능성 마그네슘 농도 (아래의 예제에서 1.5 mm까지 세트)입니다, 그리고 V M은 막 잠재력이다 (millivolts)를 앰프에서 측정된 세포의. </li><li> 동적 클램프 컴퓨터에서 출력은 아날로그 - 디지털 변환기를 통해 앰프의 명령 입력에 연결되었습니다. </li><li> 앰프는 'IC'현재 클램프 모드에 배치되었다. </li><li> RTXI (예 : 40nS)에 원하는 NMDA 수용체의 전도성을 입력합니다. 당신은 행동 잠재력의 phasic 버스트가 나타납니다. 또한, 전도성은 아날로그 출력 (그림 1A, 'g (t)')를 통해 RTXI에 주어진 수 있습니다. 적절한 스케일링 계수는 볼트에서 지멘스 신호를 변환하는 RTXI 이내에 사용해야합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 동적 클램프를 사용하여 전도성의 응용 프로그램에 대한 성공적인 설정은 그림 1A에 표시됩니다. 이 설정을 사용하여, 우리는 substantia 니그라 갈 거예요 compacta의 dopaminergic 신경 세포에서 전체 세포 체세포의 녹음을했다. Dopaminergic 세포는 일반적으로 맥박 조정기와 같은 패턴으로 낮은 속도에서 저절로 불이났다. 액션 잠재력의 파열은 동적 클램프 (그림 1B)와 NMDA 수용체의 전도성의 phasic 응용 프로그램에 의해 evoked 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2275/2275fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : 동적 클램프 기법을 사용하여 NMDA 수용체의 전도성의 응용. A. 하드웨어 설치 세포내 녹음 장비 및 동적 클램프 컴퓨터 사이의 연결을 보여주는. 액션 잠재력의 B. 파열은 substantia 니그라 갈 거예요 compacta dopaminergic 신경 세포에서 전체 셀 녹음 40nS에서 NMDA 수용체의 전도성의 응용 프로그램에 의해 evoked입니다.

<ol><li>Robinson, H. P., Kawai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+digitally+synthesized+synaptic+conductance+transients+to+measure+the+integrative+properties+of+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Injection of digitally synthesized synaptic conductance transients to measure the integrative properties of neurons.</a> J Neurosci Methods. 49, 157-165 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp%3A+artificial+conductances+in+biological+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp: artificial conductances in biological neurons.</a> Trends Neurosci. 16, 389-394 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+clamp%3A+computer-generated+conductances+in+real+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Dynamic clamp: computer-generated conductances in real neurons.</a> J Neurophysiol. 69, 992-995 (1993).</li>
<li>Prinz, A. A., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp comes of age.</a> Trends Neurosci. 27, 218-224 (2004).</li>
<li>Deister, C. A., Teagarden, M. A., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intrinsic+neuronal+oscillator+underlies+dopaminergic+neuron+bursting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">An intrinsic neuronal oscillator underlies dopaminergic neuron bursting.</a> J Neurosci. 29, 15888-15897 (2009).</li>
<li>Lobb, C. J., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+role+for+GABA+receptors+on+the+firing+pattern+of+midbrain+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A dynamic role for GABA receptors on the firing pattern of midbrain dopaminergic neurons.</a> J Neurophysiol. 104, 403-413 (2010).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

여기 시연 동적 클램프 기술은 실험자이 수용체의 활성화의 전기 효과를 모방 수 있도록함으로써 직류 분사의 전통적인 기법에이 향상됩니다. 이 비디오에서는, 우리는 dopaminergic 신경 세포의 자발적인 활동에 NMDA 수용체의 활성화의 evoked 아르 행동 잠재력의 버스트 즉 하나는 효과를 추가할 수 것으로 나타났습니다. 하드웨어 / 소프트웨어 구현의 유연성으로 인해, 확장의 다양한 사용하실 수 있습니다. 주입 전류의 서명이 활성화 수용체의 영향이 신경 세포에서 제거됩니다 시나리오를 대표하는, 긍정을 부정에서 전환하실 수 있습니다. 양식 미분 방정식의 일련의 대표 모델 뉴런은 또한 숫자 해결하고 실험자들이 소규모 네트워크를 조사하도록 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>K-gluconate anhydrous</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; X 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethylene glycol-bis(B-amin&amp;#8211;thyl ether)-N,N,N&amp;rsquo;,N&amp;rsquo;-tetraacetic acid</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgATP</td><td>시약</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaGTP</td><td>시약</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, Anhydrous</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>시약</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CholCl</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ascorbic Acid</td><td>시약</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutathione</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX51WI 현미경 (40x 대물렌즈 포함)</td><td>현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A/D 컨버터 2개</td><td>장비</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CV-7B 헤드스테이지가 장착된 Multiclamp 700B</td><td>장비</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown 마이크로피펫 풀러</td><td>장비</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfil 주사바늘</td><td>장비</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td>장비</td><td>Siskiyou, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>모니터</td><td>장비</td><td>Triview</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

동적 클램프 기법을 사용 랫 midbrain dopaminergic 뉴런에서 nmda 수용체의 전도의 응용

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Neuroscientists는 두뇌의 뉴런 통신하는 방법을 조사하여 뇌의 기능을 연구합니다. 많은 조사는 실험적으로 제어 입력에 대한 응답으로 하나 이상의 뉴런의 전기 활동의 변화보세요. 뉴런의 전기 활동은 유리 micropipettes와 패치 클램프 기법을 사용하여 절연 뇌 슬라이스에 기록하실 수 있습니다. 전통적으로, 경험이 기록된 세포의의 연결을 막에있는 수용체에 의해 슬라이스, 또는 약리 조작에있는 다른 셀 또는 남은 axonal 연결 피펫, 전기 자극을 통해 현재의 직접 분사로의 연결을 입력을 모방 수 있습니다. 직류 주사 녹음이 (보통 소마)의 사이트에서 높은 시간적 정밀도로 만들어진 전류 파형을 전달하는 장점이 있습니다. 그러나, 이것은 이온 채널이 개설되지 않습니다 물리적으로의 연결을 막의 저항을 변경하지 않습니다. 현재 분사는 일반적으로 직사각형 펄스를 고용하기 때문에 이온 채널의 반응 속도론을 모델하지 않습니다. 마지막으로, 현재 분사는 이온 채널의 개통과 함께 발생하는 세포에서 화학적 변화를 모방 수 없습니다. 수용체는 물리적 또는 전기적 자극에 의​​해 약리 활성화할 수 있습니다. 실험자들은 조각의 전기 자극과 수용체 활성화 잘 시간적 정밀도를했다. 수용체 활성화 자극시 활성화되어 어떤의 정확한 성격 그러나,이 제한됩니다 공간적 정밀도 알 수 있습니다. 이 후자의 문제는 부분적으로 특정 약리 에이전트가 완화된 수 있습니다. 불행히도, 약리 대리인의 활성화 시간 과정은 일반적으로 속도가 느린되고 기록된 세포에 입력의 공간적 정밀도 알 수 있습니다. . 검토를 위해, 프린츠 동부 표준시를 참조하고, 동적 클램프 기술은 실험자의 세포의 막 전위 (로빈슨과 카와이 1993, 샤프 외, 1993a, b의 실시간 피드백을 기반으로 세포에 직접 전달되는 전류를 변경할 수 있습니다 알. 2004). 이것은 실험자이 수용체의 활성화에 대한 응답으로 녹화 현장에서 발생하는 전기적 변화를 모방 수 있습니다. 적용 전류에 실시간으로 변경되며, 변경된 사항은 하드웨어에서 구현 수학적 방정식에 의해 결정됩니다. 우리는 최근 substantia 니그라 갈 거예요 compacta (.; 로브 외, 2010. Deister 외, 2009)의 dopaminergic 뉴런에서 NMDA 수용체의 phasic 활성화하여 실천 가능성의 파열의 생성을 조사하기 위해 동적 클램프 기법을 사용했습니다. 이 비디오에서는, 우리는 dopaminergic 신경 세포에 NMDA 수용체의 전도성을 적용하는 데 필요한 절차를 보여줍니다.

이 비디오에서는, 우리는 쥐의 뇌 조각의 전체 세포 구성에 기록된 dopaminergic 신경 세포로 전도성을 적용하는 방법을 보여줍니다. 이 기법은 동적 클램프라고합니다.

동적 클램프 기법을 사용 랫 Midbrain Dopaminergic 뉴런에서 NMDA 수용체의 전도의 응용

신경과학자들은 뇌 속의 뉴런이 어떻게 소통하는지를 조사함으로써 뇌의 기능을 연구합니다. 많은 연구자가 ...의 변화를 살펴봅니다.

신경과학자들은 뇌의 뉴런들이 어떻게 소통하는지 조사함으로써 뇌의 기능을 연구합니다. 여기서는 다이내믹 클램프(dynamic clamp) 기술을 사용하여 실험적으로 제어된 전도도를 적용함으로써 단일 뉴런의 전기적 활동 변화를 유도합니다. 먼저 얇게 절편화된 뇌 슬라이스를 제작하여 인공 뇌척수액이 채워진 배양 챔버에 보관합니다.그 다음 슬라이스를 패치 클램프 기록 장치로 옮깁니다. 뉴런을 선택한 후, 기록 증폭기에 연결된 다이내믹 클램프 컴퓨터를 사용하여 기록 전극으로 패치합니다. 세포 내에 NMDA 수용체 전도도를 적용합니다.결과 기록은 활동 전위의 버스트(burst)를 보여주며, 이는 NMDA 수용체의 활성화가 도파민성 뉴런이 버스트를 생성할 수 있게 하는 하나의 세포 기전임을 시사합니다. 직접 전류 주입이나 약물 처리와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 실험적으로 정의된 수용체의 활성화가 살아있는 뉴런의 전기적 활성에 미치는 영향을 정밀하게 결정할 수 있다는 점입니다. 마취된 Bragg dolly 쥐의 뇌를 빠르게 적출한 후, 진동 마이크로톰을 사용하여 240 µm 두께의 수평 뇌 절편을 제작합니다.절편을 자르는 대로 전이 피펫을 사용하여 기록 실험을 수행할 때까지 인공 뇌척수액이 채워진 32 °C 배양 챔버에 넣습니다. 세포 내 기록 장치는 경사 조명 대비 영상을 위해 설정된 대물렌즈가 장착된 현미경, 모니터, perfusion 시스템, multi clamp 700 B 증폭기, 아날로그-디지털 변환기, 마이크로 조절기 및 헤드 스테이지로 구성됩니다. Mac Pro 컴퓨터에서 데이터 획득 소프트웨어인 Axo Graph X와 multi clamp commander 소프트웨어를 실행합니다. 세포 내 기록 장치 및 Mac Pro 컴퓨터 옆에는 실시간 Linux가 실행되는 Sun Microsystems 컴퓨터와 아날로그-디지털 변환기가 있으며, 이는 다이내믹 클램프 기술에 사용됩니다.세포 내 기록 장치는 약 35°C의 인공 뇌척수액을 관류시켜야 합니다. 기록할 슬라이스가 수평으로 준비된 경우, 전송 피펫을 사용하여 이를 인공 뇌척수액이 담긴 페트리 접시에 옮기고, 절단 도구를 사용하여 슬라이스를 중앙선에 따라 이등분합니다. 그다음, 전기생리학적 기록을 수행하기 위해 피펫을 사용하여 슬라이스를 세포 내 기록 장치로 옮깁니다.40 x 대물렌즈를 사용하여 여기에서 표적 뉴런을 시각화하면, 개별 흑질 도파민성 뉴런이 관찰됩니다. 두 개의 가지돌기가 뻗어 나온 타원형의 세포체를 확인하십시오. 전자식 P 97 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 팁 저항이 4에서 10 mega ohms인 전극을 제작합니다.다음으로, 마이크로필 시린지 바늘을 사용하여 전극에 내부 용액을 채웁니다. 짧은 튜브로 반세포(half cell)와 연결된 시린지를 사용하여, 앰플리파이어의 헤드 스테이지에 연결된 반세포에 채워진 전극을 삽입합니다. 기록 전극에 소량의 양압을 가합니다.시각적 가이드에 따라 전극을 표적 뉴런 위로 내립니다. 세포 표면에 딤플(dimple)이 형성된 것이 관찰될 것입니다. 소량의 음압을 가하여 원하는 뉴런에 기가실(giga seal)을 형성합니다.입으로 흡입하여 씰(seal)을 파괴합니다. 이로써 전체 세포 기록(whole cell recording) 상태가 됩니다. 씰이 파괴된 후, multi clamp commander 소프트웨어 인터페이스를 사용하여 앰플리파이어를 전류를 주입할 수 없는 전류 클램프(current clamp) 모드로 설정합니다.이 세포에 NMDA 전도도를 적용하려면, 먼저 다이내믹 클램프 컴퓨터에서 RTXI 소프트웨어를 실행하십시오. 그런 다음 NMDA 수용체가 포함된 사용자 정의 모델을 메모리에 로드합니다. 모델이 RTX 메모리에 로드되면, G-N-M-D-A를 0 nS로 설정한 상태에서 여기 표시된 식을 사용하여 세포에 주입할 전류를 실시간으로 계산하겠습니다.기본적으로 Semens에서 MG는 마그네슘 농도를 의미합니다. E-N-M-D-A는 0 mV로 설정된 NMDA 수용체의 역전 전위이며, VM은 증폭기에서 측정된 세포의 막 전위(mV)입니다. 이제 표준 BNC 케이블을 사용하여 다이내믹 클램프 컴퓨터의 출력을 아날로그-디지털 변환기가 연결된 증폭기의 커맨드 입력단에 연결하십시오.Multi Clamp Commander 소프트웨어 인터페이스를 사용하여 앰플리파이어를 표준 전류 클램프 모드 ic로 설정합니다. RTXI는 Axo Graph X 데이터 수집 소프트웨어의 전압 신호로부터 원하는 컨덕턴스 GFT를 수신하도록 설정되었습니다. 여기서는 세포에 1초 동안 40 nano Siemens 컨덕턴스 스텝을 가하는 간단한 AXO Graph X 프로토콜을 실행합니다.본 동영상에서 설명한 설정을 사용하여 전도도 단계(conductance step)에 반응하여 일련의 활동 전위를 유발하였으며, 중뇌 흑질 치밀부(substantial nire pars compacta)에 있는 도파민 작동성 뉴런으로부터 전체 세포 체세포 기록(whole cell somatic recording)을 수행하였습니다. 도파민 작동성 세포는 일반적으로 페이스메이커와 유사한 패턴으로 낮은 빈도로 자발적으로 발화합니다. 다이내믹 클램프를 이용해 NMDA 수용체 전도도를 위상성으로 적용함으로써 일련의 활동 전위를 유발할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후에는 분리된 뇌 절편 내의 살아있는 도파민성 뉴런에 NMDA 전도도를 적용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 그러나 이 기술은 표준 전기생리학적 기법으로 기록 가능한 모든 세포 유형에 사용할 수 있습니다. 마찬가지로, 다이내믹 클램프(dynamic clamp)를 확장하여 광범위한 수용체 유형의 전기적 효과를 모사할 수 있습니다.이 영상이 다이내믹 클램프(dynamic clamp) 기술이 무엇인지, 그리고 저희 실험실에서 이를 어떻게 활용하는지 보여드리는 데 유용했기를 바랍니다. 시청해 주셔서 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

amperometric 기술은 자연 도파민의 산화에 의해 생성 된 산화 전류를 검출하여 하나의 세포에서 도파민 릴리스를 측정합니다. 동시 전압 클램프 및 amperometry 방법론은 도파민 수송과 도파민의 역방향 전송에서이 활동의​​ 규제 역할의 전체 '활동'사이의 기계론의 관계를 알 수있다.

동시 전압 클램프 및 Amperometry과 도파민 릴리스의 단일 세포 측정

현장 패치에 클램프 녹음은 그대로 회로의 뉴런의 electrophysiological 특성에 사용됩니다. CNS는 작고 강력한 피복에 둘러싸여 있기 때문에 Drosophila 유전자 모델 패치를 고정으로 어렵습니다. 이 문서는 이후의 패치 클램프 녹음의 집과 깨끗한 뉴런을 제거 할 수있는 절차에 대해 설명합니다.

의 작성<em&gt; Drosophila</em에 대한&gt; 중부 뉴런<em&gt; 현장에서</em&gt; 패치 클램핑

이 비디오는 수지상 멤브레인 표면에서 패치 클램프 기록 기술을 보여줍니다. 이는 도파민 뉴런에서 수상돌기와 그 아래에 있는 전위의존성 이온 채널의 전기적 특성을 직접 조사하는 데 도움이 됩니다.

Patch-Clamp Recordings from the Dendrite of a Dopaminergic Neuron in a Brain Slice

이 비디오는 내측 전전두엽 피질(mPFC) 축삭을 광유전학적으로 자극하고 LEC에서 피라미드 뉴런의 반응을 기록하여 외측 내후각 피질(LEC)의 시냅스 효율성을 연구하는 절차를 보여줍니다. 이 방법은 시냅스 가소성을 연구하기 위해 패치 클램프 녹음과 광 자극에 의한 시냅스 활성화를 결합합니다.

쥐 뇌 절편에서 시냅스 사건의 광유전학적 자극 및 전기생리학적 기록

이 비디오는 패치 클램프 기술을 사용하여 유변기저와 막 전위를 측정하고 증분 전류 주입에 대한 뉴런의 반응을 분석하여 등쪽 신경절의 감각 뉴런 흥분성을 검사하는 방법을 보여줍니다.

온전한 쥐 등쪽 뿌리 신경절에 대한 전체 세포 패치 클램프 기록

이 비디오 문서에서는 세포 기관을 패치하는 셋업 절차 및 방법 전체 마운트 마우스 망막의 신경절 세포에서 동적 클램프 레코딩을 구현하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 흥분성과 억제 시냅스 입력의 정확한 기여도 조사 및 신경 스파이크에 대한 상대적인 크기와 타이밍을 할 수 있습니다.

마우스 망막 신경절 세포의 시냅스와 인공 컨덕턴스와 동적 클램프 구현

구심성 감각 뉴런은 주변부에서 중추 신경계로 감각 정보를 알립니다. 특정 구심성 뉴런을 식별하는 것은 그들의 생리학을 이해하는 데 도움이 될 것입니다. 우리는 구심성 뉴런을 식별하기 위한 역행 라벨링 방법을 설명하고, 패치 클램프 전기생리학 및 면역세포화학을 사용하여 이러한 뉴런의 전위의존성 이온 채널을 연구합니다.

표현 이온 채널 연구에 대한 특정 감각 신경 세포 인구의 식별

여기에 설명하는 세포 부착 된 패치 클램프 기술로 하나의 이온 채널에서 현재 기록의 장기 복역을 얻기위한 절차입니다. 이 방법은 실시간으로 관찰을 허용, 생물학적 신호를 기초 개폐 채널 입체 형태의 패턴. 이 데이터는 그대로 생체막의 채널 특성에 대해 알려 드리겠습니다.

1 채널의 세포 부착 된 패치 클램프 녹음

이 원고는 패치 클램프 기록을 위해 온전한 등쪽 뿌리 신경절을 준비하는 방법을 설명합니다. 이 제제는 뉴런과 위성 신경교세포의 미세환경을 유지하여 해리된 DRG 뉴런에서 볼 수 있는 표현형 및 기능적 변화를 방지합니다.

성인 쥐에서 본래 등쪽 뿌리 신경절에 패치 클램프 녹음

Subcellular patch-clamp recordings는 수상돌기의 기능적 특성을 조사할 수 있는 가능성을 제공합니다. 그러나 이러한 미세한 구조는 직경이 작기 때문에 쉽게 접근할 수 없습니다. 여기에 설명된 프로토콜은 in vitro에서 도파민 뉴런의 수상돌기로부터 안정적이고 신뢰할 수 있는 기록 수집을 용이하게 하는 것을 목표로 합니다.

흑색질 도파민 뉴런의 Somatodendritic 도메인에서 세포 내 패치 클램프 녹음

동적 클램프 전기생리학은 신경 발화 결함과 이온 채널 기능 장애 사이의 인과 관계를 확립할 수 있습니다. 우리는 마우스 소뇌 푸르킨제 뉴런의 동적 클램프 방법 및 프로토콜을 설명하고 유용한 리소스와 기술적 고려 사항을 언급합니다. 대표적인 연구에서 우리는 반복적인 발화를 구출하기 위해 Tsc1-/- Purkinje 뉴런에 모델링된 나트륨 전도도를 추가합니다.

자폐증과 관련된 손상된 신경 흥분성을 조사하기 위한 동적 클램프 방법

학습하세요 랫 중뇌 도파민성 뉴런에서 동적 클램프 기법을 이용한 NMDA 수용체 전도 적용 방법을. 이 기술은 신경 활동을 정밀하게 제어하여 생체 뉴런의 수용체 활성화 효과를 연구하는 데 활용됩니다.

동적 클램프 기법을 사용 랫 Midbrain Dopaminergic 뉴런에서 NMDA 수용체의 전도의 응용

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