È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Titolo
- 01:24Splenic B-Lymphocyte Isolation and Stimulation
- 05:42Transfection of Producer Cells
- 07:26Infection of Stimulated Splenic B cells
- 08:12Flow Cytometry Analysis
- 08:40Rescue of AID-Deficiency by Transduction of AID-Deficient B Cells with a Recombinant Retrovirus
- 08:57Conclusion
Ett effektivt system för uppbyggnad och funktion analys av en gen i en<em> Ex vivo</em> Kultur av mjälten B-lymfocyter beskrivs. Denna metod tar fördel av rekombinant retrovirus produktion i en hjälpare fri, ecotrophic förpackning cellinje. Stabil, ärftliga uttryck av en gen av intresse inom primärvården lymfocyter uppnås leder till generation av yta antikroppar på B-celler som genomgår rekombination klass switch.
Tags
Recombinant Retroviral ProductionB CellsTransgenic ExpressionReverse Genetic ApproachHeterologous Expression SystemPhenotype AnalysisGene Over-expressionHematopoetic SystemMouse GeneticsHuman Genes And DiseasesSynteny ConservationGene DisruptionsAllelic ReplacementTransgenic Mouse CreationCell Culture Model
