داخل النخاع زرع الخلايا لاستهداف القرن بطني عنق الرحم في التصلب الجانبي وصدمة إصابة النخاع الشوكي

الهدف العام من هذا الإجراء هو استهداف الزرع المتعدد داخل العمود الفقري للخلايا السليفة العصبية إلى الحبل الشوكي العنقي ، والمادة الرمادية البطنية لكل من الفئران والفئران. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير نوع الخلية السليفة العصبية أولا محل الاهتمام للزرع. ثم يتم إجراء استئصال الصفيحة الفقرية على الحبل الشوكي في كل نقطة من مراحل زرع الخلايا المقصودة.

يتم حقن الخلايا التالية بشكل صحيح في المواقع والأعماق المناسبة لاستهداف توصيل الخلايا بدقة إلى القرن البطني للحبل الشوكي العنقي. الخطوة الأخيرة هي الاستمرار في إدارة قمع المناعة للحيوان حتى التضحية لتحقيق بقاء الخلايا المزروعة في النخاع الشوكي. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج لتتبع بقاء وهجرة وتمايز خلايا السلائف العصبية المزروعة في الحبل الشوكي العنقي للبالغين في نقاط زمنية مختلفة بعد الزرع من خلال الطرق النسيجية مثل الكيمياء المناعية وتحليل الفحص المجهري اللاحق.

العرض المرئي في هذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم العديد من الخطوات الجراحية المعقدة وزرع الخلايا في الحبل الشوكي لأنها تتطلب عناية كبيرة وتقنيات محددة وأصبحت أسهل. إذا تم استخدام هذه الإجراءات الموصى بها قبل ثلاثة أيام من الزرع ، فقم بتثبيط مناعة عن طريق إعطاء حقن يومية بمقدار 10 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم ، السيكلوسبورين أ عن طريق الحقن تحت الجلد. إذا كان سيتم زرع الخلايا المشتقة من القوارض ، أو مليغرام واحد لكل كيلوغرام من وزن الجسم لكل من FK 5 0 6 والرابامايسين عن طريق الحقن داخل الصفاق.

إذا كان سيتم زرع الخلايا المشتقة من الإنسان ، فقم أيضا بتشكيل مشابك ورق متينة لتشكيل ضاغطات. اقطع جزءا من مشبك الورق لعمل خطاف وثني الطرف الآخر من مشبك الورق في حلقة صغيرة. ثم اربط الخيط من خلال حلقة كل ضام ، وأجهزة التعقيم ، وأجهزة التباعيد ، وجميع الأدوات التي سيتم استخدامها في الجراحة في يوم الجراحة.

قم بإعداد حصص من الخلايا الدبقية أو الخلايا الأخرى المراد زرعها وفقا للإجراءات الموضحة في البروتوكول المكتوب. بمجرد حصاد الخلايا ، قم بتوزيع معلقات الخلية بين أنابيب طرد مركزي دقيقة متعددة سعة 1.5 مليلتر ، واستمر في وضع الثلج الرطب. ثم بعد إعطاء طريقة مناسبة للتخدير للحيوان ، تأكد من أنه تم تحقيق اللوم المخدر المناسب للجراحة عن طريق إجراء قرصة إصبع القدم.

باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة ظهر ، يحلق الشعر من منطقة منقارية قليلا إلى الأذنين إلى منتصف ظهر جيدا ويزيل الشعر المقطوع من الجلد لمنع دخول الشعر إلى الشق. بعد ذلك ، انقع قطعة من الشاش بمحلول مطهر لليود بوفيدون وضعه على الجلد فوق المنطقة المحلوقة. افرك مرتين على الأقل بمحلول مطهر ومرتين بالكحول أو المطهر المخفف بطريقة دائرية.

بدءا من موقع الشق المتجه للخارج باتجاه خط الشعر. ضع وسادة شاش ملفوفة معقمة على لوح جراحة نظيف وقم بلصق الوسادة على السبورة حتى لا تتحرك. ضع فوق الشاش المدلفن في وضع التقليم.

مد ذراعي على الوسادة ثم الصق الذراعين على الوسادة ولوحة الجراحة لدعم الحبل الشوكي العنقي. سيسهل ذلك العمل طوال الجراحة حيث يوجد الحبل العنقي في أعماق سطح الجلد. يجب استخدام ستارة جراحية معقمة أثناء هذا الإجراء ، على الرغم من عدم ظهور ذلك في الفيديو لأغراض العرض التوضيحي.

أولا ، أثناء النظر من خلال المجهر الجراحي الذي تم ضبطه بأقل تكبير ، استخدم مشرطا معقما حادا لعمل شق في خط الوسط من قاعدة الجمجمة إلى لوح الكتف. ثم قم بعمل شق من خلال طبقات العضلات الثلاث فوق العمود الفقري. استخدم ضغطا كافيا لقطع جميع طبقات العضلات بأقل عدد من الجروح ، لكن لا تضغط بقوة شديدة لأن ذلك قد يتسبب في تلف الأنسجة العميقة باستخدام قضيبين قطنيين.

استخدم حركة التواء لفصل العضلة العلوية عن العضلة المجاورة الشوكية. لا تقطع أو تمزق العضلات لأن ذلك سيسبب النزيف. ضع أربعة من الضاعرات محلية الصنع في موضعها لسحب العضلات.

ثم اسحب كل من الضواعق الأربعة إلى جميع الزوايا الأربع وقم بلصق الخيوط على اللوحة لتأمين الضام. يجب أن يكون التعريض النهائي على شكل مربع أو مستطيل. استخدم ملقط مسننة للفئران ومقص زنبركي متوسط الحجم لإزالة العضلة المجاورة الشوكية من السطح الظهري للفقرات.

خذ الجروح بالقرب من العظم لكشف سطح العظام بشكل أفضل. تأكد من أن الجروح موازية لسطح الفقرات ، لكن لا تقطع الحبل. قم بتبديل مقص الزنبرك متوسط الحجم للحصول على حصة خام.

ثم قم بتأمين العمود الفقري بالكامل عن طريق الإمساك بالعضلة فوق عملية C الثانية باستخدام ملقط أسنان الفئران واستخدام الخام لسحب العضلات بعيدا عن المستوى C أربعة و C خمسة و C ستة. ثم ابدأ استئصال الصفيحة الفقرية في C 5. مرة أخرى ، قم بتأمين المنطقة عن طريق الإمساك ب C اثنين باستخدام ملقط مسنن للفئران.

أمسك الصفيحة بأكملها ب هي الخام وضع الحصة الخام بحيث تكون الأداة عمودية تماما على محور العمود الفقري. سحق الصفيحة ببطء وبلطف دون الضغط لأسفل في الحبل الشوكي. ثم اسحب قطعة العظم المكسورة برفق لأعلى.

بعد ذلك ، ضع جير الخام بشكل عمودي على العمود الفقري. ثم أدخل الجر الخام برفق تحت العظم بزاوية 30 إلى 60 درجة بالنسبة لسطح الحبل. قم بعمل جروح صغيرة لتمديد استئصال الصفيحة الفقرية إلى جميع C four إلى C six lamini.

لا تقم بتمديد استئصال الصفيحة الفقرية بشكل جانبي لأن ذلك سيسبب النزيف. قم بزيادة تكبير المجهر إلى حوالي 15 ضعفا وركز على الحبل. استخدم حاد مستقيم.

عدد خمسة ملقط لتنظيف النسيج الضام أعلى الجافية. ثم استخدم إما مقصا صغيرا أو سكينا صغيرا لشق الجافية الموازية لمحور العمود الفقري. كنقطة وسطية فقط إلى منطقة دخول الجذور الظهرية ، تأكد من ثقب الجافية في الموقع للحقن.

بعد الثقب ، سوف يسكب السائل الشوكي الدماغي الجاف على سطح الحبل الجاف والتعرض بالكامل بشاش أو قضيب قطني. استخدم الملقط للإمساك بالجافية ورفعها قليلا بعيدا عن الحبل الشوكي دون الضغط على الحبل الشوكي أو إصابته. قم بتمديد الشق قليلا في المحور الحبلي المنقاري باستخدام حقنة إبرة قابلة للإزالة من نوع هاميلتون سعة 10 ميكرولتر.

مزودة بإبرة هاميلتون معدنية مشطوفة حادة بقياس 33 درجة 45 درجة. قم بتحميل الحجم المطلوب من تعليق الخلية ببطء لموقع حقن واحد. اخفض طرف الإبرة باتجاه السطح الظهري للحبل الشوكي أثناء مراقبة تقدمه من خلال المجهر.

قم بمحاذاة المحقنة مع محور العمود الفقري لاستهداف المنطقة التشريحية المرغوبة بشكل صحيح ، مع توجيه الإبرة إلى ما يقرب من 90 درجة قدر الإمكان وفقط في منطقة دخول الجذور الظهرية. المس سطح الحبل الشوكي برفق بطرف الإبرة ، مع الضغط قليلا على الحبل الشوكي بطرف الإبرة. ثم اسحب الإبرة حتى يعود الحبل الشوكي إلى الوضع الطبيعي.

سجل هذا الموضع على أن Z يساوي 0.0 باستخدام المسطرة الموجودة على المعالج الصغير. بعد ذلك ، أثناء مراقبة التقدم بصريا من خلال المجهر ، قم بخفض الإبرة قليلا في الحبل الشوكي. اخفض الإبرة لتكييف 1.5 ملم لاستهداف القرن البطني في فأر بالغ.

اترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق قبل بدء الحقن. تأكد من بقاء الإعداد الجراحي دون إزعاج خلال هذا الوقت. بعد ذلك ، قم بحقن ميكرولترين من الخلايا على مدى دقيقتين إلى خمس دقائق بمعدل ثابت باستخدام وحدة التحكم في المضخة بعد الحقن ، واترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق.

ثم اسحب الإبرة بعناية من النخاع الشوكي. كرر عملية الحقن للمواقع المستهدفة الأخرى. بمجرد حقن جميع المواقع المستهدفة ، أعد المجهر إلى أدنى تكبير وخياطة.

أغلقت جميع طبقات العضلات الثلاث المغطى في وقت واحد بأربع عضلات خياطة صفرية في ثلاثة مواقع في المحور الحري المنقاري. قم بتدبيس الجلد بإغلاق مشابك الجرح بطول تسعة ملليمترات ، مما يضمن تباعد الدبابيس بحوالي 0.5 سم. شد الدبابيس باستخدام حاملات الإبر لمنع من سحب الدبابيس قبل التئام الجروح بالكامل.

ضع محلول مطهر povidone IRD على منطقة جرح الشق بشاش مبلل واسمح للحيوان بالتعافي من التخدير على وسادة ماء دافئ متداولة. استمر في حقن السيكلوسبورين A أو FK 5 0 6 حقن الرابامايسين يوميا حتى وصول التضحية ب 50،000 فأر. تم زرع الخلايا السلفية الدبقية في القرن البطني للحبل الشوكي المستوى C أربعة في SOD واحد G 93 الفئران.

توضح هذه الصورة أن M اثنين من الفأر الإيجابي قد وصل ، ونجت الخلايا المزروعة بعد شهر واحد من الزرع ، وأن الخلايا موضعية في المادة الرمادية البطنية البطنية ، لكن موقع الحقن غاب عن القرن البطني الجانبي كما يدل على الخط المنقط. كما هو موضح هنا ، يؤدي حقن أعداد أكبر بكثير من الخلايا في هذه المنطقة إلى تلف في موقع الحقن وعلى طول مسار الإبرة. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في حوالي 45 إلى 60 دقيقة لستة مواقع حقن إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.