Name: Leishmaniosi cutanea nella pelle dorsale di criceti: un modello utile per lo screening delle droghe Antileishmanial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Impara l'inoculazione intradermica di promastigoti di Leishmania nella pelle dorsale del criceto per studiare la leishmaniosi cutanea. Questo modello ottimizzato migliora la caratterizzazione delle lesioni e lo screening di farmaci antileishmaniali preservando il benessere animale.

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Questo studio è stato sostenuto dalle concessioni dal Comitato per la Ricerca presso l&#39;Università di Antioquia (CODI), l&#39;Istituto Colombiano per lo sviluppo di Scienza e Tecnologia - COLCIENCIAS e il Centro per lo sviluppo dei prodotti contro le malattie tropicali - CIDEPRO.

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Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Leishmaniosi cutanea è endemica nelle regioni tropicali ed neotropicale. E &#39;spesso definito come un gruppo di malattie a causa del variegato spettro di manifestazioni cliniche, che vanno da piccoli noduli cutanei lordo distruzione dei tessuti della mucosa. Maggior parte dei farmaci disponibili sono costose, richiedono regimi di trattamento a lungo e stanno diventando sempre più inefficace, rendendo necessaria la scoperta di nuovi farmaci. Il modello di topo è ampiamente utilizzato, ma pr...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Tipo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Ketamina </td><td> Reagente </td><td> Holliday-Scott SA </td><td></td></tr><tr><td> Xilacine </td><td> Reagente </td><td> Sintesi </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Reagente </td><td> GIBCO </td><td> 14190-136 </td></tr><tr><td> Calibro digitale </td><td> Attrezzatura </td><td> Pescatore </td><td> 15-077-958 </td></tr><tr><td> Giemsa </td><td> Reagente </td><td> SIGMA </td><td> GS1L-1L </td></tr><tr><td> Formalina </td><td> Reagente </td><td> Nova lab </td><td> 11273 </td></tr><tr><td> Paraffina </td><td> Reagente </td><td> Pechiney Plastic Packaging </td><td> PM-996 </td></tr><tr><td> Haemotoxilin </td><td> Reagente </td><td> Nova lab </td><td&gt; 10870103 </td></tr><tr><td> Eosina </td><td></td><td> Nova lab </td><td> 10870203 </td></tr><tr><td> Kodak Ektachem chimica a secco </td><td> Attrezzatura </td><td> Kodak Ektachem </td><td> DT-60 </td></tr><tr><td> meglumina antimoniato </td><td> Reagente </td><td> Aventis </td><td></td></tr><tr><td> Microscopia </td><td> Attrezzatura </td><td> Nikon </td><td> YS2-T </td></tr></tbody></table>

leishmaniosi cutanea nella pelle dorsale di criceti: ​​un modello utile per lo screening delle droghe antileishmanial

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Tradizionalmente, i criceti sono sperimentalmente inoculati nel muso o la zampa. Tuttavia, in questi siti non si verifica sempre l&#39;ulcera, la misurazione della dimensione della lesione è una procedura difficile e animali mostrano difficoltà a mangiare, respirare e muoversi a causa della lesione. Per ottimizzare il modello criceto per la leishmaniosi cutanea, maschio e femmina adulti giovani criceti dorati (Mesocricetus auratus) sono stati iniettati per via intradermica alla pelle dorsale con da 1 a 1,5 x l0 7 promastigoti di Leishmania e la progressione di lesioni successive sono state valutate sino a 16 settimane post infezione. Il criceto dorato è stato scelto perché è considerato il adeguate bio-modello per valutare i farmaci contro la Leishmania in quanto sono suscettibili alle infezioni da specie diverse. Infezione cutanea dei risultati criceti nelle lesioni croniche ma controllata, e una evoluzione clinica con segni simili a quelli osservati negli esseri umani. Pertanto, l&#39;istituzione of l&#39;estensione dell&#39;infezione misurando la dimensione della lesione in base alla zona di indurimento e ulcere è fattibile. Questo approccio ha dimostrato la sua versatilità e facilità di gestione durante l &#39;inoculazione, follow-up e caratterizzazione delle lesioni tipiche (ulcere), l&#39;applicazione di trattamenti in diversi modi e di ottenere dei campioni clinici dopo diversi trattamenti. Utilizzando questo metodo la qualità della vita animale per quanto riguarda la locomozione, la ricerca di cibo e acqua, il gioco e le attività sociali isalso conservati.

Ottimizzazione del modello sperimentale per criceto leishmaniosi cutanea da iniezione intradermica di<em&gt; Leishmania</em&gt; Promastigoti la pelle dorsale. Questo approccio è utile durante l &#39;inoculazione, il follow-up, la caratterizzazione delle lesioni, l&#39;applicazione di trattamenti e di ottenere dei campioni clinici. Locomotion, ricerca di cibo e acqua, attività ludiche e sociali sono conservati.

Leishmaniosi cutanea nella pelle dorsale di criceti: ​​un modello utile per lo screening delle droghe Antileishmanial

Tradizionalmente, i criceti vengono inoculati sperimentalmente nel muso o nel polpastrello. Tuttavia, in questi siti non si verifica sempre la formazione di un'ulcera; la misurazione di...

Al fine di ottimizzare il modello del criceto per la leishmaniosi cutanea, qui descriviamo un approccio che prevede l'inoculazione intradermica di promastigoti nel dorso della cute. Questo approccio ha dimostrato la propria versatilità e facilità di gestione durante l'inoculazione, il follow-up e la caratterizzazione delle lesioni tipiche, l'applicazione di trattamenti mediante diverse vie, il prelievo di campioni paraclinici, l'acquisizione di dati sui diversi composti promettenti, senza comportare un significativo peggioramento della qualità della vita del modello.Per quanto riguarda la locomozione, la ricerca di cibo e acqua, il gioco e l'attività sociale, si devono eseguire movimenti con attenzione, sicuri e stabili; l'animale deve essere immobilizzato alla base del collo utilizzando le dita, sfruttando la grande quantità di pelle presente nel criceto. Il palmo della mano viene utilizzato per offrire all'animale una superficie di appoggio in cui si senta a proprio agio. Una volta che l'animale si sente rilassato, la pelle del collo e delle guance può essere stirata con l'indice e il pollice, mentre con le restanti dita si tiene saldamente la pelle della sacca contro il palmo, in modo da immobilizzare completamente l'animale.Una caratteristica distintiva nella femmina è la visualizzazione della linea Mi Mary, ben evidente già dalla prima settimana di età. Un'altra caratteristica è la breve distanza ano-genitale. Per quanto riguarda il sesso del maschio, si può osservare la sacca scrotale contenente i testicoli.Oltre a questo, e come conseguenza, vi è una maggiore distanza tra l'ano e la pelle del quarto. L'animale viene afferrato tenendo saldamente la base del collo e posizionandolo in una trappola o scatola posta su una bilancia precedentemente tarata; dopo alcuni secondi si attende che l'animale si sistemi comodamente in questo spazio, quindi si effettua la lettura del peso che viene immediatamente registrata nel formato appropriato.I metodi più comuni per l'identificazione dei criceti sono la colorazione di un'area della pelle con acido piri e la perforazione dell'orecchio per la colorazione. Con l'acido piri, la procedura è la seguente: afferrare l'animale come indicato in precedenza e, con un tampone imbevuto di acido piri, impregnare la regione da marcare, solitamente l'arto anteriore o posteriore sinistro o destro, con una quantità sufficiente per garantire che il segno duri fino al termine del test. Per questo metodo di identificazione, si raccomanda di mantenere l'animale sotto sedazione o anestesia.Sebbene non sia strettamente necessario, si seleziona l'U da etichettare e la si disinfetta con alcol. Successivamente, si sceglie la zona da perforare, evitando la regione con vasi sanguigni. Quindi si pratica il foro utilizzando un punch per orecchie adatto ai roditori; la procedura deve essere eseguita rapidamente, ma in modo fermo e sicuro.Dato che in una gabbia dovrebbero esserci due o tre animali, si possono praticare fino a due fori all'anno. Per applicare l'anestetico all'animale, esso deve essere tenuto come indicato all'inizio, in modo da impedire i movimenti del criceto con l'animale.In posizione supina, la zona addominale in cui verrà applicato il farmaco viene disinfettata utilizzando alcol al 70% e asciugata con un batuffolo di cotone pulito. La via intraperitoneale viene utilizzata inclinando leggermente l'animale verso la testa in modo che si verifichi lo spostamento viscerale. L'ago viene inserito completamente in modo leggermente parallelo alla spina dorsale.Viene effettuato un iniziale aspirato per confermare che nessun organo sia stato perforato, quindi il farmaco viene applicato per rasare l'area cutanea da inoculare sull'animale. Dopo aver posizionato correttamente l'animale, viene segnato un punto a due centimetri dalla base della coda. Con l'uso di forbici, tutti i peli vengono rimossi, liberando con attenzione un'area di circa due centimetri quadrati, evitando lesioni, all'interno di una cappa a sicurezza biologica; con il criceto anestetizzato, in una siringa da un millilitro vengono caricati 100 microlitri della quantità nota di fase logaritmica.Viene somministrato il pro maus di leishmania. L'ago deve essere fissato alla siringa come precauzione per evitare incidenti. Un batuffolo di cotone con soluzione salina sterile viene utilizzato per pulire l'area rasata dell'animale in un'unica direzione.Successivamente, con il bevel dell'ago rivolto verso l'alto, si penetra la pelle del criceto, assicurandosi che l'ago entri nel sottoderma in modo lento e graduale. L'inoculo viene iniettato per formare una papula sottoderma; per rimuovere l'ago, si ruota leggermente e si estrae. Tutti i materiali utilizzati vengono smaltiti.Seguendo gli standard di biosicurezza per il monitoraggio delle lesioni cutanee provocate da Leishmania, si raccomanda un'iniziale immobilizzazione dell'animale in una trappola per facilitare il processo di misurazione accurata di una lesione. La palpazione dell'area cutanea inoculata viene eseguita per delimitare l'indurimento e l'ulcera formata, con l'aiuto di un calibro digitale; si copre la larghezza dell'ulcera e si registra la misurazione in millimetri in un modulo predisposto per il monitoraggio clinico. Analogamente, si misura la lunghezza dell'ulcera, che deve essere anch'essa registrata dopo l'inoculazione sottocutanea.Il tempo di attesa per ottenere lesioni tipiche paragonabili a quelle presentate negli esseri umani è compreso tra quattro e cinque settimane. L'animale viene immobilizzato in un supporto speciale che permette di esporre la schiena, dove si trova la lesione.Utilizzando un contagocce, il composto viene applicato sulla ferita e il liquido viene lasciato asciugare prima di restituire l'animale alla sua gabbia. Con l'animale saldamente fissato come illustrato sopra, la mano più abile viene utilizzata per disinfettare l'area con alcol e cotone in un'unica direzione. Successivamente, la stessa mano viene utilizzata per manovrare la siringa contenente il farmaco da somministrare, in un volume massimo di 200 microlitri.Il farmaco viene iniettato attraverso il muscolo semitendinoso o i muscoli semimembranosi delle zampe posteriori. Se il farmaco deve essere somministrato per diversi giorni, è necessario alternare gli arti per evitare fastidio e danni all'animale; con una mano meno esperta, l'animale viene fissato come precedentemente indicato. L'altra mano viene utilizzata per manovrare la sonda orogastrica.14 garage collegato a una siringa da un millilitro per somministrare comodamente un volume non superiore a 200 microlitri. Il criceto viene fissato saldamente con un dispositivo immobilizzatore che espone l'area da trattare, la quale viene pulita con cotone sterile e soluzione salina mediante un unico passaggio in una direzione, utilizzando una siringa da un millilitro con il becco rivolto verso il basso e un volume non superiore a 100 microlitri. Viene effettuato un singolo approccio sottocutaneo a partire da un vertice delle lesioni e il farmaco viene depositato gradualmente, coprendo l'intera area della lesione prima dell'eutanasia. Gli animali vengono anestetizzati come descritto in precedenza per il processo di eutanasia.Il criceto viene portato in una camera sigillata in acrilico collegata a un cilindro o a una rete di anidride carbonica. La valvola viene aperta lentamente per diversi minuti per prelevare i criceti sacrificati fissati su una superficie di dissezione. Sono necessarie lampade a luce fredda per ottenere impronte della pelle e degli organi interni.Tubi falcon da 15 millilitri con formalina al 10% per campioni di istopatologia e materiale comprendente strumenti per dissezione, forbici, pinzette, bisturi, manici e lame. Infine, la presenza di leishmania in campioni provenienti da lesioni cutanee o cicatrici, fegato, milza, rene e linfonodi poplitei viene determinata direttamente mediante esame di strisci colorati con Giemsa ed esame istopatologico di questi tessuti. Un campione bioptico viene fissato in formalina al 10% e incluso in paraffina.Sezioni di tessuto fissato di cinque micron sono state colorate con ematossilina, eosina e osservate al microscopio ottico con immersione in olio a 1000× per studiare la microarchitettura, le caratteristiche dell'infiltrato cellulare e la presenza o assenza di parassiti. Sono state acquisite fotomicrografie e immagini digitali.Tutti i materiali devono essere smaltiti seguendo le normative di biosicurezza per lo smaltimento dei rifiuti biologici. Il criceto dorato Mi si è rivelato particolarmente utile per lo studio delle lesioni cutanee causate da specie di Leishmania del Vecchio e del Nuovo Mondo. L'inoculazione di pro magos è in grado di causare lesioni cutanee tra uno e due mesi dopo l'inoculazione.Il criceto sviluppa un'evoluzione prevedibile della malattia dopo infezione sperimentale, caratterizzata dalla formazione di lesioni simili a quelle osservate nell'uomo; a causa della natura cronica delle lesioni cutanee nel modello del criceto, è possibile monitorare gli interventi terapeutici per lunghi periodi. Tradizionalmente, i criceti vengono inoculati sperimentalmente sul muso o sul cuscinetto plantare, tuttavia, in questi siti, le lesioni non si manifestano sempre. Inoltre, la misurazione della dimensione delle lesioni è difficile da eseguire e i criceti mostrano difficoltà nell'alimentarsi, respirare e muoversi.In sintesi, questo approccio dimostra che le caratteristiche patologiche cliniche delle leishmaniosi cutanee indotte sulla pelle dorsale dei criceti sono notevolmente simili a quelle della malattia umana, ma sorprendentemente diverse dal modello marino comunemente utilizzato. Pertanto, l'infezione sperimentale sulla pelle dorsale dei criceti rappresenta un modello utile per validare il potenziale di composti candidati a diventare farmaci per l'H manuale.

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