Name: Human Interne borstslagader (IMA) Transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose Studie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Leer hoe intimaal hyperplasie wordt bestudeerd in een gehumaniseerd rattenmodel met een gestente humane interne borstslagader. Deze methode maakt evaluatie van menselijke stents in menselijk weefsel mogelijk voor translationeel vasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Christiane Pahrmann voor haar bijdrage. Met dank aan Ethicon, Norderstedt, Hamburg (Duitsland) voor het verstrekken van hechtmateriaal. Financiering Sonja Schrepfer heeft een onderzoeksbeurs van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 en SCHR992/4-1).] Het werk werd ondersteund door de ISHLT Shumway Career Development Grant 2010 en de Falk Onderzoek Financiering (Stanford University).

1. Interne borstslagader (IMA) Voorbereiding <ol><li> De arteriële endotheel wordt kaal door de passage van een 2-franse Fogarty arteriële embolectomie katheter (Baxter Healthcare, Deerfield, IL, USA). De katheter wordt getrokken door het gehele schip lengte twee keer op endotheliale schade te verzekeren. </li><li> Gebruik een menselijke stent van 8 mm lang en 2,5 mm-3 mm in diameter (bijv. Translumina, Yukon stent). Let: De diameter van de stent de bloedvaten met niet meer dan 10% vóór en na stent stenose voorkomen. LET OP: de lengte van de stent niet veranderen binnen dezelfde studie. </li><li> Implementeren de stent met de juiste ballon druk (die wordt opgemerkt de stent pakket) om de gewenste diameter te bereiken. </li><li> Store gestente IMA in 4 ° C RPMI + heparine (500 IE/10 ml) op ijs tot transplantatie. </li></ol> 2. Toebereiding van dieren RNU Naakt (CRL: NIH-Foxn1rnu) ratten (300-350 g) zijn housed onder gebruikelijke voorwaarden in scantainer geventileerde kasten, gevoed standaard rat chow en geautoclaveerd water ad libidum. <ol><li> Verdoof rat met isofluraan (2,5-3%) met behulp van een inductie kamer. </li><li> Scheer de buik-haar en zet de rat op zijn rug en plaats een masker over zijn neus en mond te houden van de anesthesie. </li><li> Ontsmet de buikstreek op ruime schaal in Provo-Jodium, naast het gebruik 80% ethanol - twee keer herhaalt u deze stap. Controleer reflexen knijpen de achterpoten om zeker te zijn dat de rat voldoende is verdoofd. </li><li> Onder microscopisch beeld, voert u een bovenste mediaan laparotomie om de infrarenale abdominale aorta bloot te leggen. </li><li> Plaats de darmen in een zoutoplossing gehydrateerde handschoen. Vouw de handschoen rond de darmen om het verlies van vocht te voorkomen. </li><li> Ontleden de aorta van de infrarenale regio naar de splitsing, zorgvuldig om geen schade te veroorzaken op de takken van de schepen. </li><li> Gebruik micro klemmen om de aorta bloedstroom te stoppen. Plaats hetproximale klem, gevolgd door het distale klem. </li><li> Verwijder een app. 0,5-0,7 mm aorta-segment en spoel de resterende aorta met heparine (200 eenheden). </li><li> Neem het gestente IMA en het verkorten tot het juiste lengte en plaats deze in het gat. </li><li> Sluit de IMA aan de ontvanger aorta, door het uitvoeren van hechtingen met 8-0 prolene hechting (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). </li><li> Open voorzichtig de eerste schedel klem en daarna de staart klem. </li><li> Er moet een zichtbaar puls in de getransplanteerde IMA en aan het distale einde van de aorta zijn. </li><li> Plaats de darmen in de buik. </li><li> Spoel de buik met voorverwarmde steriele zoutoplossing. </li><li> Sluit de spierlaag van de buikwand met 6-0 prolene lopen hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland). </li><li> Terwijl de rat is nog steeds in de anesthesie, subcutaan injecteren 4-5 mg / kg Carprofen. </li><li> Dien post-operatieve analgesie in voorkomend geval (bijv. Carprofen of Meloxicam) gedurende 3 dagen na de chirurgischeery. </li></ol> 3. Representatieve resultaten Voor histologie, werden de monsters gefixeerd in 4% formaline, gedehydrateerd in een gegradeerde reeks alcohol en geïnfiltreerd in een mengsel (MMA I) van 80% methylmethacrylaat en 20% dibutylftalaat gedurende 1 dag, MMA I met 1% droge benzoylperoxyde voor 1 dag en MMA I 3% droge benzoylperoxide (MMA III) gedurende 1-2 dagen bij 4 ° C. Daarna werden de monsters gepolymeriseerd in verse MMA III in glazen flesjes in een waterbad op een pre-gepolymeriseerde basis. Slow polymerisatie werd bereikt door het houden van de flacons bij 26 ° C gedurende de nacht, het verhogen van de temperatuur tot 28 ° C de volgende ochtend, en dan het verhogen van de temperatuur geleidelijk met 0,5 ° C meer dan 12 uur tot polymerisatie heeft plaatsgevonden. De gepolymeriseerde blokken waren coupes op 5 micrometer dikte van het gebruik van een Microm HM 360 microtoom voorzien van een hardmetalen mes. Om het ontstaan ​​van prolifererende cellen (Figuur 1) bepalen, slides werden gekleurd met antilichamen identificeren of de groen fluorescerend eiwit (GFP) en rat MHC-I en menselijke gladde spiercellen. Voor deze studies werd de menselijke IMA geïncubeerd met het reportergen GFP &#39;s nachts met behulp van lentivirale deeltjes voor een stabiele transductie van IMA cellen. Het verdelen dochter cellen van menselijke oorsprong kon worden geïdentificeerd met het uitspreken van GFP. Na deparaffinization wordt de warmte-geïnduceerd herstel van de epitoop uitgevoerd door het verwarmen van de dia&#39;s in antigen herstel oplossing met behulp van een stoomboot. De afbeelding-iT FX signaal enhancer kan worden gebruikt voor de blokkeringsstap. Cellen van humane oorsprong zijn aangegeven met de muis monoklonale antilichamen tegen GFP (1:100 verdund in primaire antilichaam oplosmiddel (Dako)), en verder voorzien van geit anti-muis IgG, Alexa Fluor 488 (1:1000 verdund in secundair antilichaam verdunningsmiddel ). De gladde spiercellen zijn gemarkeerd met het konijnen anti-polycolonal gladde spier α-actine (1:100 verdund in primaire antilichaam verdunningsmiddel), gevolgd door geit-anti-konijn IgG, Alexa Fluor 555 (1:1000 verdund in secundaire antilichaam verdunningsmiddelen). Elk antilichaam incubatiestap wordt uitgevoerd bij 37 ° C gedurende 1 uur driemaal wassen tussen PBS. Kernen zijn gekleurd met DAPI gedurende 10 minuten. Na montage van de dia&#39;s met behulp van Verleng Gold antifade reagens, werden monsters geanalyseerd met behulp van confocale microscopie. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3663/3663fig1.jpg" /> Figuur 1. De neo-intima-cellen als menselijke gladde spiercellen A:.. Groen = anti GFP, etikettering cellen van menselijke oorsprong; rood = anti menselijke gladde spiercellen actine, blauw = DAPI, het identificeren van celkernen B: Groen = anti rat MHC-I, etikettering cellen van rat oorsprong; rood = anti menselijke gladde spiercellen actine, blauw = DAPI, het identificeren van celkernen. Prolifererende cellen worden aangeduid als gladde spiercellen en positief voor GFP, maar negatief voor de rat MHC-I molecuul. Daarom prolifererende cellen zijn humane oorsprong.

<ol><li>Deuse, T., Ikeno, F., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+In-Stent+Restenosis%3A+An+Inexpensive%2C+Reliable%2C+and+Rapid+Preclinical+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model.</a> J. Vis. Exp. (31), e1346(2009).</li>
<li>Oyamada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-iliac+rat+aorta+stenting%3A+a+novel+high+throughput+preclinical+stent+model+for+restenosis+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis.</a> J. Surg. Res. 166, e91-e95 (2011).</li>
<li>Chamberlain, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+research%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovascular research. 85, 38-44 (2010).</li>
<li>Deuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+the+first+polymer-free+leflunomide+eluting+stent%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Introducing the first polymer-free leflunomide eluting stent.</a> Atherosclerosis. 200, 126-134 (2008).</li>
<li>Finn, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+healing+after+sirolimus%2C+paclitaxel%2C+and+bare+metal+stent+placement+in+combination+with+peroxisome+proliferator-activator+receptor+gamma+agonists%3A+requirement+for+mTOR%2FAkt2+in+PPARgamma+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Differential healing after sirolimus, paclitaxel, and bare metal stent placement in combination with peroxisome proliferator-activator receptor gamma agonists: requirement for mTOR/Akt2 in PPARgamma activation.</a> Circulation research. 105, 1003-1012 (2009).</li>
<li>Tellez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+bare+metal+stent+implantation+in+homozygous+LDL+receptor+deficient+swine+induces+a+neointimal+formation+pattern+similar+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Coronary bare metal stent implantation in homozygous LDL receptor deficient swine induces a neointimal formation pattern similar to humans.</a> Atherosclerosis. 213, 518-524 (2010).</li>
<li>Suzuki, Y., Yeung, A. C., Ikeno, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-clinical+animal+model+in+the+translational+research+of+interventional+cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovasc.+Interv%22%5BJournal%5D)">The pre-clinical animal model in the translational research of interventional cardiology.</a> JACC Cardiovasc. Interv. 2, 373-383 (2009).</li>
<li>Holt, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+in+an+organ+culture+of+human+internal+mammary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+research%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation in an organ culture of human internal mammary artery.</a> Cardiovascular research. 26, 1189-1194 (1992).</li>
<li>Swanson, N., Javed, Q., Hogrefe, K., Gershlick, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+internal+mammary+artery+organ+culture+model+of+coronary+stenting%3A+a+novel+investigation+of+smooth+muscle+cell+response+to+drug-eluting+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Sci.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Human internal mammary artery organ culture model of coronary stenting: a novel investigation of smooth muscle cell response to drug-eluting stents.</a> Clin. Sci. (Lond). 103, 347-353 (2002).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Hoewel verschillende in-vivo-onderzoek modellen zijn de bestaande aan de ontwikkeling van intima hyperplasie te onderzoeken na het plaatsen van een stent, deze modellen nog steeds geconfronteerd met translationeel hindernissen te overwinnen. Bovendien, grote diermodellen zijn duur en speciale huisvesting en medische apparatuur is niet beschikbaar voor alle laboratoria. Een menselijke IMA de ontwikkeling van intimale menselijke proliferatie en in-stent restenose bestudeerd voor e...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> 2 Franse Fogarty katheter </td><td> Baxter Healthcare, Deerfield, IL, USA </td><td> 120602F </td><td></td></tr><tr><td> Yukon Stent </td><td> Translumina GmbH, Hechingen, Duitsland </td><td></td><td> Gebruik de stent van uw keuze op basis van uw studie protocol </td></tr><tr><td> RPMI-media </td><td> Biochrom </td><td> Nr.F1275 </td><td></td></tr><tr><td> heparine </td><td> Baxter </td><td> 2B0953 </td><td></td></tr><tr><td> isofluraan </td><td> Abt </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Provo-Jodium </td><td> Betadine Puredue Pharma </td><td> EAN: 5995327165830 </td><td></td></tr><tr><td> 80% ethanol </td><td> Geyer </td><td> ETV 80/0500 </td><td></td></tr><tr><td> Micro klem </td><td> Harvard Apparatuur </td><td> PY2-61-0186 </td><td></td></tr><tr><td> Hechtingen 8-0 </td><td> Johnson &amp; Johnson, </td><td> 2808G </td><td></td></tr><tr><td> Hechtingen 6-0 </td><td> Johnson &amp; Johnson, </td><td> 1698 H </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> Feizer Vet </td><td> PZN: 0110208 </td><td></td></tr><tr><td> Metamizol </td><td> Ratiopharm </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Target Retrieval Solution, pH9 </td><td> Dako </td><td> S2368 </td><td></td></tr><tr><td> Image-iT FX-signaal versterker </td><td> Invitrogen </td><td> I36933 </td><td></td></tr><tr><td> muis monoclonaal anti-GFP antilichaam </td><td> BD Living Colors </td><td> 632381 </td><td></td></tr><tr><td> primair antilichaam verdunningsmiddel </td><td> Dako </td><td> S3022 </td><td></td></tr><tr><td> geit-anti-muis IgG, Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11017 </td><td></td></tr><tr><td> secundair antilichaam verdunningsmiddel </td><td> Dako </td><td> S0809 </td><td></td></tr><tr><td> konijn polycolonal anti-gladde spier α-actine </td><td> Abcam, </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> geit-anti-konijn IgG, Alexa Fluor 555 </td><td> Invitrogen </td><td> A21430 </td><td></td></tr><tr><td> Verleng Gold antifade reagens </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

human interne borstslagader (ima) transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose studie

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Gegevens uit het preklinisch in vivo onderzoek modellen om pathobiological en pathofysiologische processen te onderzoeken in de ontwikkeling van intima hyperplasie na schip stenting zijn cruciaal voor translationele benadering 1,2. De meest gebruikte diermodellen zijn muizen, ratten, konijnen en varkens 3-5. Echter, de vertaling van deze modellen in de klinische omgeving blijft het moeilijk, omdat die biologische processen zijn reeds bestudeerd in dier schepen, maar niet eerder in de menselijke onderzoeksmodellen 6,7. In deze video demonstreren we een nieuw gehumaniseerd model om dit translationele kloof te overwinnen. De getoonde werkwijze is reproduceerbaar, gemakkelijk en snel uit te voeren en is geschikt voor de ontwikkeling van intimale hyperplasie en de toepasbaarheid van diverse stents bestuderen. Deze video laat zien hoe u de stent techniek in menselijke voertuigen, gevolgd door transplantatie in immunodeficiënte ratten enidentificeert de oorsprong van prolifererende cellen mens.

Deze video toont een model om de ontwikkeling van intima hyperplasie studeren na stent met behulp van een menselijk vat (IMA) in een immunodeficiënte rat model.

Human Interne borstslagader (IMA) Transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose Studie

Preklinische in vivo onderzoekmodellen om pathobiologische en pathofysiologische processen te bestuderen bij de ontwikkeling van intimale hyperplasie na vaat...

Het algemene doel van deze procedure is om de ontwikkeling van intimale hyperplasie in een gehumaniseerd model te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst een sectie van een menselijke arteria mammaria of IMA te denuderen met behulp van een two French fogerty-katheter. Vervolgens wordt er een stent in de IMA geplaatst.Vervolgens wordt een segment van de abdominale aorta van de rat vervangen door een IMA met stent. Ten slotte wordt de wond gehecht en krijgt het dier de tijd om te herstellen; de endotheelschade als gevolg van de invasieve procedure van ballondilatatie en stenting leidt tot ontsteking en de productie van inflammatoire cytokinen. Dit leidt tot de proliferatie van gladde spiercellen, die het vatlumine progressief occluderen, wat resulteert in stenose.Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de proliferatie van menselijke gladde spiercellen aantonen via immunofluorescentie-confocale microscopie. Vandaag tonen we u een model voor de beoordeling van polsstenose in menselijke slagaders in een rode gastheer. Het voordeel van dit model ten opzichte van bestaande technieken, zoals de abdominale natte aortastenting, is dat we menselijke stents in menselijk weefsel ku

human-internal-mammary-artery-ima-transplantation-stenting-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze video laat zien hoe een preklinische goedkoop en betrouwbaar model te gebruiken om pathobiological en pathofysiologische processen van in-stent restenose ontwikkeling te bestuderen. Longitudinale in vivo monitoring met behulp van OCT (Optical Coherence Tomography) en analyse van oktober beelden zijn ook aangetoond.

Imaging in-stent restenose: een goedkope, betrouwbare en snelle preklinisch model

Een model van stent implantatie in muizen halsslagader wordt beschreven. In vergelijking met andere, soortgelijke middelen, deze procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, het aanbieden van de mogelijkheid om te studeren in een handige manier de vaatwand reactie op verschillende drug-eluting stents en de moleculaire mechanismen van restenose.

Een Muizenmodel van Stent Implantatie in de halsslagader voor de Studie van Restenose

Restenosis na cardiovasculaire procedures (bypass operatie, angioplastie of stenting) is een significant probleem waardoor de duurzaamheid van deze procedures wordt verminderd. Een ideale therapie zou de proliferatie van gladde spiercellen (VSMC) verhinderen, terwijl het bevorderen van regeneratie van het endothelium. We beschrijven een model voor gelijktijdige beoordeling van VSMC proliferatie en endotheliale functie in vivo.

Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt<em&gt; In Vivo</em&gt; Model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie

Dit werk demonstreert een nieuwe aanpak om het proliferatie-, differentiatie- en vaartuigvormende potentieel van vasculaire endotheliale stamcellen (VESC's) te beoordelen door middel van transpiratie van de dikke dikvliesvoeding, gevolgd door een full-mount weefselbereiding voor microscopische observatie. Ook wordt een lineage-tracingsstrategie om het gedrag van VESC's in vivo te onderzoeken, ook voorgesteld.

Een nieuwe Mammary Fat Pad Transplantation Technique om de Vessel Generation van Vasculaire Endotheliale Stamcellen te visualiseren

Dit artikel demonstreert een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie (MH) na de ballon van de aorta blessure.

Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta

Het huidige protocol is gericht op het experimenteel creëren van veneuze intimale hyperplasie door het onderwerpen van aderen aan arteriële bloeddruk voor het ontwikkelen van strategieën om veneuze intimale hyperplasie te verzachten na revascularisatie chirurgie met behulp van adergrafts.

Een konijn veneuze interposition model nabootsen revascularisatie chirurgie met behulp van ader grafts te beoordelen Intimal Hyperplasie onder arteriële bloeddruk

Dit protocol beschrijft de implantatie van menselijke coronaire stents in de abdominale aorta van ratten met een apoE-/- achtergrond met behulp van een trans-femurtoegang. In vergelijking met andere diermodellen hebben murinemodellen de voordelen van een hoge doorvoer, reproduceerbaarheid, gebruiksgemak en huisvesting en een brede beschikbaarheid van moleculaire markers.

Implantatie van coronaire stents op mensenmaat in rat abdominale aorta met behulp van een trans-femorale toegang

In dit protocol werd nieuwe varkensaderbypass-enting uitgevoerd via een kleine incisie in de linkerborstwand zonder cardiopulmonale bypass. Er werd een postoperatief pathologisch onderzoek gedaan, dat intimale verdikking aantoonde.

Vaststelling en evaluatie van een model voor varkensaderziekte

Hier presenteren we een muizenmodel voor anastomose van de dijbeenslagader, en bieden we onderzoekers een waardevol diermodel om vasculaire anastomosestenose te bestuderen en te simuleren. Deze ontwikkeling is cruciaal voor het vergroten van ons begrip van de pathofysiologie die aan deze aandoening ten grondslag ligt en voor het mogelijk maken van nauwkeuriger en effectiever onderzoek naar vaatziekten.

Ontwikkeling van een muizenmodel voor anastomosestenose van de dijbeenslagader

Deze video toont de orthotope aorta transplantatie model als een eenvoudig model om de ontwikkeling van transplantatie vasculopathie (TVP) studie bij ratten.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Leer hoe intimaal hyperplasie wordt bestudeerd in een gehumaniseerd rattenmodel met een gestente humane interne borstslagader. Deze methode maakt evaluatie van menselijke stents in menselijk weefsel mogelijk voor translationeel vasculair onderzoek.

Human Interne borstslagader (IMA) Transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose Studie (Video) | JoVE Journal

Human Interne borstslagader (IMA) Transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose Studie

Meer video's verkennen