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TransFLP - um método para modificar geneticamente<em> Vibrio cholerae</em> Com base Transformação Natural e recombinação FLP-
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JoVE Journal Immunologia e infezioni
TransFLP — A Method to Genetically Modify Vibrio cholerae Based on Natural Transformation and FLP-recombination

TransFLP - um método para modificar geneticamente<em> Vibrio cholerae</em> Com base Transformação Natural e recombinação FLP-

DOI:
10.3791/3761-v

•

12:13 min

•

October 08, 2012

•

1Global Health Institute, School of Life Sciences,Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL)

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 01:16Preparation of Chitin Flakes
  • 01:39Oligonucleotide Design and Polymerase Chain Reaction
  • 03:45Chitin-induced Natural Transformation
  • 04:59Removal of Selective Cassette(s) by FLP-recombination
  • 05:46Plasmid Curing
  • 06:21Results: Representative TransFLP Modifications of V. cholerae
  • 11:34Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Um método rápido para modificar o genoma de<em> V. cholerae</em> É descrito. Essas modificações incluem a eliminação de genes individuais, grupos de genes e ilhas genômicas, bem como a integração de seqüências curtas (por exemplo, elementos promotor ou afinidade tag-seqüências). O método baseia-se na transformação de recombinação natural e FLP.

Tags

TransFLPGenetically ModifyVibrio CholeraeNatural TransformationFLP-recombinationBacterial ChromosomesReplicative PlasmidsHomology-mediated RecombinationInsertional MutantsPlasmid ExcisionGram-negative BacteriaLevan Sucrase EnzymeSacB GenePre-insertion GenotypeModified GeneTime-consumingCloningHorizontal TransferArtificial TransformationPositive SelectionRapid ManipulationChitin-mediated InductionNatural Competence

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