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Affinità Precipitazioni di Active Rho-GEFs Utilizzo di un GST-tagged Mutant proteina Rho (GST-RhoA (G17A)) da lisati di cellule epiteliali
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Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
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Affinità Precipitazioni di Active Rho-GEFs Utilizzo di un GST-tagged Mutant proteina Rho (GST-RhoA (G17A)) da lisati di cellule epiteliali

DOI:
10.3791/3932-v

•

11:28 min

•

March 31, 2012

•

, , , ,
1Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , 2Department of Surgery,University of Toronto, 3Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Il metodo qui presentato descrive un saggio per seguire l'attivazione di specifici RhoA PIL / GTP Fattori di cambio (GEFs) in cellule coltivate facendo uso di una proteina di fusione GST RhoA mutante che ha un'elevata affinità per GEFs attivati. GEFs vengono precipitati da lisati cellulari, rilevati da Western blotting e quantificato mediante densitometria.

Tags

Affinity PrecipitationRho-GEFsGST-tagged Mutant Rho ProteinCytoskeleton RegulationCellular ProcessesGTPasesGuanine-nucleotide Exchange FactorPathway-specific RegulationRegulatory NetworksActive Pool Of GEFsAffinity Precipitation AssayBurridge Lab

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