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Un protocollo per l'identificazione di interazioni proteina-proteina Sulla base di<sup> 15</sup> N marcatura metabolica, immunoprecipitazione, Spettrometria di massa quantitativa e di affinità di modulazione
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JoVE Journal Biologia
A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation
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Un protocollo per l'identificazione di interazioni proteina-proteina Sulla base di<sup> 15</sup> N marcatura metabolica, immunoprecipitazione, Spettrometria di massa quantitativa e di affinità di modulazione

DOI:
10.3791/4083-v

•

14:44 min

•

September 24, 2012

•

, , , , ,
1Max Planck Institute of Molecular Plant Physiology, 2University of Kaiserslautern

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 02:30Cell Lysis, Crosslinking and Sample Preparation
  • 05:22Immunoprecipitation
  • 07:06Sample Preparation for nano-LC-MS/MS
  • 10:50Results: HSP70B with its Nucleotide Exchange Factor CGE1
  • 14:07Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Vi presentiamo una variante del RAPIDO (immunoprecipitazione quantitativi combinazione con smontabile), approccio che è stato introdotto in precedenza per distinguere tra vero e falso interazioni proteina-proteina. Il nostro approccio è basato sulla<sup> 15N</sup> Marcatura metabolica, la modulazione di affinità di interazioni proteina-proteina dalla presenza / assenza di ATP, immunoprecipitazione e spettrometria di massa quantitativa.

Tags

Protein-protein Interactions15N Metabolic LabelingImmunoprecipitationQuantitative Mass SpectrometryAffinity ModulationCo-immunoprecipitationTargeted ApproachMass Spectrometry (LC-MS/MS)False Positive DiscoveriesRNAiQUICK (QUantitative Immunoprecipitation Combined With Knockdown)

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