/
/
Kvantitativ FRET (Förster Resonance Energy Transfer) Analyse for SENP1 Protease Kinetics Bestemmelse
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Titolo
- 02:20Plasmid Constructs
- 03:07Protein Expression and Purification
- 06:16FRET-based Protease Assay for Enzyme Kinetic Study
- 08:54Quantitative FRET Spectrum Analysis
- 13:36Representative Results
- 15:11Conclusion
En ny fremgangsmåte som involverer kvantitativ analyse av FRET (Förster Resonance Energy Transfer) signaler er beskrevet for å studere enzymkinetikk.<em> K<sub> M</sub</em> Og<em> K<sub> Katt</sub</em> Ble oppnådd for den hydrolyse av den katalytiske domenet av SENP1 (SUMO / Sentrin spesifikk protease 1) til pre-SUMO1 (Lie ubiquitin-lignende Modifier). De generelle prinsippene i denne kvantitative-FRET-baserte protease kinetisk studie kan brukes til andre proteaser.
Tags
Quantitative FRET AnalysisF&246;rster Resonance Energy TransferSENP1 Protease Kinetics DeterminationPosttranslational ModificationsUbiquitinUbiquitin-like ProteinsProtein Activity RegulationSUMO ModificationCellular ProcessesSUMO-specific ProteaseEndopeptidaseIsopeptidaseCatalytic EfficiencySpecificityKinetic ConstantsKcat/KM RatioMethods For Determining Kinetic ParametersPolyacrylamide Gel-based Western-blotRadioactive-labeled SubstrateFluorescent CompoundProtein Labeled Substrate
