È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Titolo
- 00:11Introduction
- 01:32Panoramica
- 01:37Competitive Elution with Biotin
- 02:44Denaturing Elution with SDS
- 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
- 04:10Protocol
- 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
- 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
- 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
- 12:18Washing of the Resin
- 14:23Elution of Specific Protein Complexes
- 15:32Representative Results
- 17:18Conclusion
En metode er beskrevet til effektiv rensning af twin-Strep-kodede fusionsproteiner og deres specifikke komplekser på modificeret streptavidin (Strep-Tactin) harpiks kovalent krydsbundet med Bis (sulfosuccinimidyl) suberat (BS3). Fremgangsmåden har fordelene ved hurtig hastighed, god målprotein nyttiggørelse og høj renhed, og er forenelig med efterfølgende analyse ved massespektrometri.
