Rivista
/
Biologia
/
Ein-Schritt-Reinigung von Twin-Strep-markierten Proteine ​​und ihre Komplexe auf Mit Bis (Sulfosuccinimidyl) Strep-Tactin Resin Vernetzte suberat (BS3)
JoVE Journal
Biologia
Author Produced
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo.  Accedi o inizia la tua prova gratuita.
JoVE Journal Biologia
One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Ein-Schritt-Reinigung von Twin-Strep-markierten Proteine ​​und ihre Komplexe auf Mit Bis (Sulfosuccinimidyl) Strep-Tactin Resin Vernetzte suberat (BS3)

DOI:
10.3791/51536-v

•

18:27 min

•

April 20, 2014

•

, , ,
1Department of Food and Environmental Sciences,University of Helsinki, 2Institute of Biotechnology,University of Helsinki

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 00:11Introduction
  • 01:32Panoramica
  • 01:37Competitive Elution with Biotin
  • 02:44Denaturing Elution with SDS
  • 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
  • 04:10Protocol
  • 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
  • 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
  • 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
  • 12:18Washing of the Resin
  • 14:23Elution of Specific Protein Complexes
  • 15:32Representative Results
  • 17:18Conclusion

Summary

Traduzione automatica

Traduzione automatica

Es wird ein Verfahren zur effizienten Reinigung von Doppel Strep-tag-Fusionsproteine ​​und deren Komplexe spezifisch auf modifizierte Streptavidin beschrieben (Strep-Tactin)-Harz kovalent mit Bis (sulfosuccinimidyl) suberat (BS3) vernetzt. Das Verfahren hat die Vorteile der schnellen Geschwindigkeit, gute Zielprotein Recovery und hohe Reinheit und ist mit nachfolgender Analyse durch Massenspektrometrie kompatibel.

Tags

Keywords: Twin-Strep-tagSIII-tagStrep-TactinAffinity PurificationBis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)Cross-linkingSDS ElutionProtein ComplexesMass SpectrometryVPg-ProN. Benthamiana

Article

Embed

AGGIUNGI ALLA PLAYLIST

Usage Statistics

Video correlati

check_url/it/51536?article_type=v

Reinigung und Visualisierung von Influenza A Virus Ribonukleoproteinkomplexe
check_url/it/51536?article_type=v

Identifizierung von Protein-Komplexen mit der quantitativen Proteomik in S. cerevisiae
check_url/it/51536?article_type=v

Färbung von Proteinen in Gelen mit Coomassie G-250 ohne organische Lösungsmittel und Essigsäure
check_url/it/51536?article_type=v

Genetic Studies of Human DNA-Reparatur-Proteinen unter Verwendung von Hefe als Modellsystem
check_url/it/51536?article_type=v

Ein-Schritt-Metabolomics: Kohlenhydrate, organische und Aminosäuren in einem einzigen Verfahren Quantifizierte
check_url/it/51536?article_type=v

Herstellung, Reinigung und Charakterisierung von Lanthanoidkomplexe für die Verwendung als Kontrastmittel für die Magnetresonanz-Tomographie
check_url/it/51536?article_type=v

Identifizierung von Protein-Komplexen in<em> Escherichia coli</em> Mit Sequential Peptide Affinity Purification in Kombination mit Tandem-Massenspektrometrie
check_url/it/51536?article_type=v

Formulierungen für die Gefriertrocknung von Bakterien und deren Einfluss auf Zellebensdauer
check_url/it/51536?article_type=v

High-throughput Reinigung von Affinity-markierter rekombinanter Proteine
check_url/it/51536?article_type=v

Reinigung von Transcripts und Metaboliten aus<em> Drosophila</em> Köpfe

Read Article