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Generation and Purification of Human INO80 Chromatin Remodeling Complexes and Subcomplexes
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Production et purification des droits de INO80 remodelage de la chromatine Complexes et Subcomplexes

DOI:
10.3791/51720-v

•

08:44 min

•

October 23, 2014

•

, , ,
1Stowers Institute for Medical Research, 2Department of Biochemistry & Molecular Biology,Kansas University Medical Center

Capitoli

  • 00:05Titolo
  • 01:23Isolation of Nuclei
  • 02:45Extracting Nuclei with Salt
  • 04:38Immunoaffinity Purification of the Human INO80 or INO80 Subcomplexes
  • 06:53Results: Analysis of the Composition of Immunopurified INO80 Complexes and Subcomplexes
  • 08:01Conclusion

Summary

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Ce protocole décrit un procédé pour la production et la purification de type sauvage et les versions mutantes du complexe de remodelage de la chromatine humaine INO80. Marquage épitopique versions de sous-unités INO80 sont exprimés de manière stable dans des cellules HEK293, et les complexes et les complexes dépourvus complets des ensembles spécifiques de sous-unités sont purifiés par chromatographie d'immuno-affinité.

Tags

INO80 Chromatin Remodeling ComplexNucleosome DynamicsDNA AccessibilityATP-dependent Nucleosome RemodelingIno80 ATPaseFLAG-tagged Ino80HEK 293 CellsSiRNA DepletionFLAG ImmunoprecipitationSubcomplexesMass SpectrometryChromatin Remodeling Assays

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