زراعة خلايا الثدييات عن طريق استخدام المفرد نظام هوائي تفاعلات الاحيائية

الهدف العام من هذا الإجراء هو زراعة كميات كبيرة من خلايا الثدييات. يتم تحقيق ذلك عن طريق معايرة الأس الهيدروجيني والأكسجين المذاب أولا أو إجراء مجسات ، ثم تعقيم الأس الهيدروجيني ، وإجراء المجسات وكم مسبار درجة الحرارة. الخطوة الثانية هي إدخال المجسات والغلاف في الوعاء ووضع الوعاء على المفاعل الحيوي وتوصيل العادم والفلتر وخطوط الغاز ومسبار درجة الحرارة.

الخطوة التالية هي توصيل كبلات DO و pH وتوصيل الناقلات المتوسطة والصغيرة التي يتم ضخها في المفاعل الحيوي بشكل معم. الخطوة الأخيرة هي بدء تشغيل وحدات التحكم لضمان تحقيق المفاعل الحيوي لسرعة المكره ودرجة الحرارة وتشبع الأكسجين المطلوبة. في النهاية ، بعد التلقيح والمراقبة الحاسوبية ، يمكن معالجة المزرعة لاستخراج وتنقية المنتج المطلوب.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل المفاعل الحيوي لخزان التحريك القابل لإعادة الاستخدام ، هي أن المفاعل الحيوي لعجلة الهواء سهل الاستخدام ويقلل من فرص التلوث الميكروبي. هيا بنا نبدأ. لبدء البروتوكول ، قم بتسجيل الدخول إلى شاشة مرحبا.

بعد ذلك ، افحص مستشعر الأس الهيدروجيني وتأكد من أن طرف المستشعر مملوء بمحلول الإلكتروليت. احصل على كوب واحد بمحلول الأس الهيدروجيني الرابع ، ودورق آخر بمحلول الأس الهيدروجيني السابع وزجاجة غسيل بالماء المقطر. ثم قم بتوصيل كابل الأس الهيدروجيني بمستشعر الأس الهيدروجيني.

انتقل إلى علامة تبويب الإجراءات على واجهة مرحبا ، وحدد معايرة. ثم حدد علامة التبويب PHA ومعايرة نقطتين. أدخل درجة حرارة المخزن المؤقت في حقل درجة حرارة محلول المعايرة.

ضع المستشعر في محلول الأس الهيدروجيني الرابع للمعايرة أدخل القيمة في حقل الصفر. بمجرد استقرار الرسم البياني ، ادفع مستشعر الأس الهيدروجيني ومعايرته واشطفه بالماء المقطر. كرر المعايرة لدرجة الحموضة سبعة واحفظ الإعدادات.

أدخل قيمة المخزن المؤقت في حقل الامتداد وانتظر حتى يستقر الكسب غير المشروع. لبدء الأكسجين المذاب أو القيام بالمعايرة. تأكد من توصيل مستشعر DO بالنظام لعدة ساعات وتم استقطابه داخل علامة تبويب المعايرة، وحدد DOA ومعايرة نقطتين.

افصل مستشعر DO. أدخل الصفر في علامة التبويب صفر، وانتظر حتى يستقر الرسم البياني. قبل تحديد معايرة واحدة، أعد توصيل مستشعر do وأدخل 100 في حقل الامتداد.

عندما يستقر الرسم البياني، انقر فوق معايرة اثنين. ثم احفظ الإعدادات وأغلق البرنامج. بعد المعايرة ، ضع المستشعرات والبئر الحراري في أكياس الأوتوكلاف وقم بالتعقيم لمدة 30 دقيقة عند 121 درجة مئوية و 15 رطل لكل بوصة مربعة.

بعد انتهاء الأوتوكلاف ، قم بتعقيم أكياس الأوتوكلاف بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ وانقل الأكياس إلى خزانة السلامة البيولوجية أو BSC. قم بتعقيم وإدخال وعاء الكاشف في BSC. قم بإزالة العبوة الداخلية وافحص الوعاء والأنبوب بحثا عن التلف.

بعد ذلك ، قم بتثبيت مستشعر DO في المنفذ الأيسر الأمامي لوعاء الكاشف والبئر الحراري في المنفذ الخلفي الأيسر. قم بتثبيت مستشعر الأس الهيدروجيني في المنفذ الأمامي الأيمن للتثبيت. افتح غطاء المستشعر وقم بربط المستشعر برفق في المنفذ الموجود أعلى الوعاء.

ثم انقل السفينة خارج BSC. تأكد من أن كبلات مستشعر الأس الهيدروجيني و DO خارج غلاف الوعاء ولا يوجد أي شيء داخل الغلاف. أمسك الوعاء بحيث تكون في مواجهة الأمام وحرك أقدام الوعاء أولا في الغلاف.

تأكد من أن قاع الوعاء يستريح على السخانات. ثم قم بتركيب مستشعر درجة الحرارة بعناية في الوعاء الحراري. حسنا. بعد ذلك ، قم بإزالة مجموعات الأنابيب من الكيس.

قم بمطابقة الترميز اللوني على الأنبوب مع الموصلات والمضخات المقابلة في وحدة التحكم في المفاعل الحيوي. قم بتوجيه خطوط إضافة الوسائط وأخذ العينات خلف مستشعر DO والحراري. حسنا ، أدخل الأنبوب في المضخة المرمزة بالألوان على الجانب الأيسر من المفاعل الحيوي.

قم بتوصيل خطوط الغاز الرئيسية والصغيرة. اضغط على موصل خط الغاز الرئيسي في مخرج الغاز الخاص به لتثبيت خط الغاز الرئيسي. ثم قم بلف موصل خط الغاز الصغير في اتجاه عقارب الساعة في مخرج الغاز الخاص به لتثبيت خط الغاز الصغير.

لتثبيت أنبوب فرن الفلتر ، افتح فرن الفلتر وقم بتأمين أنبوب مرشح العادم في uan. تأكد من أن الأنبوب يمر عبر الخطافين إلى الفلتر ويخرج من الفرن. قم بتوجيه الخط السفلي عبر الخطاف الموجود أسفل فرن الفلتر وأغلق الباب.

ثم قم بتوصيل الكابلات بمستشعرات DO و pH . بعد اكتمال التثبيت ، قم بتشكيل وصلة معقمة باستخدام تركيبات الإغراء بين خط الإصدار المتوسط غير المستخدم ومصدر كيس الزجاجة المتوسط. انتقل إلى علامة تبويب الإجراءات على واجهة Hello.

انقر فوق مضخات التحكم، وحدد مضخة الوسائط، وانقر فوق شريط التمرير لتشغيل مضخة الوسائط. ثم أضف 1.5 إلى 3.0 لترات من الوسائط ، وانقر فوق شريط التمرير لإيقاف تشغيل المضخة. النظام جاهز الآن لضخ الناقلات الصغيرة المعدة مسبقا إلى المفاعل.

يمكن إضافتها باستخدام سطر إضافة. قم بتوصيل زجاجة MICROCAR بخط الإضافة المناسب باستخدام قفل إغراء معقم. قم بتشغيل مضخة الإضافة داخل شاشة مضخة التحكم.

بعد إضافة الناقلات الصغيرة ، قم بإيقاف تشغيل المضخة باستخدام شريط التمرير ، وانتقل مرة أخرى إلى الشاشة الرئيسية على واجهة Hello ، وحدد الإجراءات ثم تقدم. حدد وحدة التحكم المناسبة لتحرير الإعدادات. اضبط وحدات التحكم على تلقائي وأدخل نقاط الضبط.

بعد ضبط وحدات التحكم ، قم بتشغيل مضخة الهواء. انظر داخل وعاء الكاشف للتأكد من دوران عجلة الهواء. تأكد من استقطاب مستشعر DO بالكامل وأن قيمة الفعل قد استقرت.

ثم قم بمعايرة شكل مستشعر do ، وهو اتصال معقم بين خط إضافة متوسط غير مستخدم تم تحديده بواسطة شريط برتقالي واحد ومصدر كيس زجاجة الخلية باستخدام تركيبات الإغراء. بعد ذلك ، قم بتثبيت قسم السيليكون من الأنبوب في مضخة الوسائط. تأكد من أن مشبك الأنبوب مفتوح وأن مشبك الأنبوب المتفرع مغلق.

انتقل إلى علامة تبويب مضخة التحكم ثم قم بتشغيل مضخة الوسائط. أضف الخلايا وقم بإيقاف تشغيل مضخة الوسائط. بعد التطعيم، انتقل إلى علامة تبويب الإجراءات وحدد أخذ عينة.

تأكد من أن أنبوب أخذ العينات موجود في مضخة أخذ العينات وقم بمعالجة قضيب إيقاف أخذ العينات وفقا للتعليمات التي تظهر على الشاشة. قم بإزالة المحقنة مع العينة لعد الخلايا وتقوم تطبيقات المصب الأخرى بإجراء تعداد الخلايا. أخيرا ، عندما تصل الخلايا إلى الكثافة المطلوبة البالغة 1.2 في 10 إلى الخلايا الست لكل مليلتر ، أضف لقاح الفيروس بشكل إنتاني إلى حقنة سعة 20 ملليلترا.

قم بتوصيل المحقنة بمنفذ إضافة احتياطي على المفاعل. استخدم شاشة مضخة التحكم لتشغيل مضخة الإضافة وإضافة لقاح الفيروس. التزمت غالبية الخلايا A 5 49 بالناقلات الدقيقة في غضون ساعتين.

بعد 12 ساعة ، أظهرت الخلايا علامات التسطيح والانتشار على سطح السيارة الصغيرة. بحلول 24 ساعة ، عرضت الناقلات الصغيرة توزيعا متساويا للخلايا. يحدث استعمار السيارات الصغيرة بسرعة كما هو موضح هنا.

النسبة المئوية لاستعمار السيارات الصغيرة بواسطة 54 9 خلايا هي 75٪ بحلول 24 ساعة. يوضح هذا الرسم البياني عدد الخلايا القابلة للحياة 54 9 في الثقافة قبل وبعد الإصابة بالفيروس الغدي. تستمر الخلايا في النمو بشكل كبير إلى 1 مليون خلية لكل مليلتر بعد 48 ساعة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تجميع وتشغيل مفاعل حيوي لعجلة الهواء لزراعة خلايا الثدييات بكثافة عالية لإنتاج الخلايا أو البروتين. شكرا لك على المشاهدة ونتمنى لك الفرصة مع تجاربك.