Las inyecciones intravenosas en ratones recién nacidos
November 11th, 2014
Los modelos animales de enfermedad pediátrica pueden experimentar aparición temprana y progresión de la enfermedad agresiva. Clínicamente entrega terapia pertinente a jóvenes modelos de ratón puede ser técnicamente difícil. Este protocolo describe un método de inyección intravenosa no invasivo para ratones recién nacidos dentro de los dos primeros días después del parto de la vida.
El objetivo general de este procedimiento es administrar por vía intravenosa un artículo de prueba a un ratón recién nacido. Esto se logra identificando primero a los ratones de uno o dos días de edad que se van a tratar. El segundo paso es preparar los materiales de inyección.
A continuación, se realiza la inyección. El paso final es devolver los ratones tratados y despiertos a su madre. En última instancia, se requiere un ensayo posterior para determinar si el artículo de prueba tiene el efecto deseado.
Por lo general, las personas nuevas en este método tienen más dificultades para identificar y apuntar a la vena adecuada. Para comenzar, reúna todo el equipo necesario para el procedimiento de inyección. Además, prepare un tinte azul Evans al 1% en PBS y una jeringa de insulina con una aguja de calibre 30 por animal a inyectar.
A continuación, retira la madre a una jaula separada mientras manipulas a los cachorros. Cuando esté listo. Coloque un solo cachorro directamente sobre hielo húmedo durante 30 a 60 segundos.
Para anestesiar. No deje al animal en el hielo demasiado tiempo debido al riesgo de complicaciones relacionadas con la hipotermia mientras el animal está en el hielo. Jeringa de loto con 30 microlitros de tinte azul de Evan.
Cuando el animal esté completamente anestesiado, confirmado por la falta de movimiento en el hielo mientras aún respira, muévalo bajo el microscopio para una inyección con la mano derecha, coloque el hocico del animal en el lugar correcto. El dedo índice izquierdo en el hocico y el dedo medio izquierdo mimado hacia el auricular para que el auricular quede entre los dedos índice y medio. Examine justo antes del auricular para ver si hay un capilar superficial que se mueve cuando se manipula la piel.
Este capilar no es el objetivo. Sin embargo, la identificación es importante para la identificación de la vena temporal. A continuación, localice una vena oscura y sombría inferior al capilar que permanece fija independientemente de la posición de la piel.
La vena temporal aparece sombría, va de dorsal a ventral y desemboca en la vena yugular. Introduzca la vena temporal con el bisel de la aguja hacia arriba. Si se inserta correctamente.
Es posible ver el bisel de la aguja lleno de sangre a través de la piel. Luego presione el émbolo lentamente y note el blanqueamiento de la vena por el costado de la cara. Permita que la aguja permanezca dentro de la vena durante 10 a 15 segundos adicionales para evitar el reflujo de la inyección.
Después de una inyección adecuada, el cachorro debería ponerse azul. Casi de inmediato. Retire la aguja y aplique un hisopo de algodón en el lugar de la inyección hasta que la sangre se coagule.
Permita que el cachorro se recupere y se recaliente. Confirme que el cachorro está consciente, erguido y en movimiento. Antes de regresar a la jaula, los cachorros pueden ser ahuecados en las manos enguantadas del investigador para proporcionar el calor adecuado para ayudar en la recuperación.
Alternativamente, coloque una almohadilla térmica debajo de la jaula de casa para facilitar el calentamiento del cachorro inyectado. Vuelva a colocar al cachorro en la jaula de casa y cúbralo con ropa de cama. Para asegurar la aceptación de reac por parte de la madre, use una nueva jeringa y un hisopo de algodón para cada cachorro para mantener la esterilidad después de la inyección intravenosa del neonato de un A V nine La expresión transgénica de Inod GFP se observa en todo el cerebro, incluido el cuerpo estriado anterior, así como la protuberancia y el cerebelo.
La expresión de GFP también se detecta en la médula espinal y se observa tanto en las neuronas motoras espinales como en las neuronas de los ganglios de la raíz dorsal. La inmunofluorescencia de GFP es detectable en el ratón, el corazón y el hígado adultos después de la inyección intravenosa neonatal de A A V nueve GFP autocomplementarios. En comparación, la expresión de GFP está ausente en el corazón y el hígado de los ratones no inyectados una vez dominados.
Esta técnica debe tomar de tres a cinco minutos por animal. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar inyecciones intravenosas en ratones recién nacidos.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Visión general
Este protocolo describe un método no invasivo para la inyección intravenosa en ratones recién nacidos, facilitando la administración de artículos de prueba para la investigación de enfermedades pediátricas. El procedimiento está diseñado para ratones dentro de los primeros dos días de vida postnatal, abordando los desafíos en la administración de terapias.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Modelos de enfermedades pediátricas
Antecedentes
- Los modelos animales de enfermedades pediátricas a menudo muestran inicio temprano y progresión rápida.
- La administración de terapias a ratones jóvenes puede ser técnicamente desafiante.
- Los métodos no invasivos son esenciales para la entrega efectiva del tratamiento.
Propósito del estudio
- Proporcionar un método confiable para la inyección intravenosa en ratones neonatales.
- Facilitar el estudio de los efectos terapéuticos en modelos de enfermedades pediátricas.
- Mejorar la precisión de la administración del tratamiento en las primeras etapas de la vida.
Métodos utilizados
- Identificación de ratones de uno a dos días de edad para el tratamiento.
- Preparación de materiales de inyección.
- Ejecución de la inyección intravenosa.
- Devolución de los ratones tratados a su madre después de la inyección.
Principales resultados
- Entrega exitosa de artículos de prueba a ratones neonatales.
- Estrés mínimo para los animales durante el procedimiento.
- Facilitación de ensayos posteriores para evaluar los efectos del tratamiento.
Conclusiones
- El método descrito es efectivo para la administración intravenosa en ratones recién nacidos.
- Este enfoque puede mejorar la investigación sobre enfermedades pediátricas.
- Estudios futuros pueden basarse en este protocolo para varias evaluaciones terapéuticas.
